외 인 항 원 십자가-프레 젠 테이 션에의 바인딩과 그물 관련 성능 저하 막 구획의 정화

이 실험의 전반적인 목표는 외인성 항원의 ERAD와 같은 분해가 교차 제시로 수행되는 막질 구획을 정제하는 것입니다. 이 방법은 세포 구획의 규명 또는 교차 제시에서 ERAD와 같은 저하와 같은 면역 기간의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 정제된 소포가 모든 분자 작용을 포함한다는 것입니다. 이를 통해 모든 외인성 항원의 ERAD와 유사한 분해가 가능합니다. 따라서 이 방법은 교차 프레젠테이션에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 수지상 세포에 의해, 교차 제시 능력을 보이는 다른 유형의 항원 제시 세포에도 적용될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 불특정 배경을 모두 제외하는 것이 불가능하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 정제 하루 전에 DC2.4 세포를 RPMI 완충액의 조직 배양 플레이트에서 mL당 10만 개의 세포로 분할합니다. 외인성 항원 혼입 가능성을 높이기 위해 세포를 융합 상태로 유지하지 마십시오. DC2.4 세포가 반융합되기 전에 비오틴화 오브알부민(biotinylated ovalbumin, bOVA)을 외인성 항원으로 첨가합니다. 그런 다음 2-4시간 동안 배양합니다. 조직 플레이트에서 새로운 50mL 원뿔형 튜브로 부드럽게 피펫팅하여 세포를 수확합니다. 1000 X G에서 4시에 5분 동안 세포를 원심분리합니다.