Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an <em>in Situ </em>Proximity Ligation Assay

Sofiia Karchugina; Jonathan Chernoff

doi:10.3791/57755

제자리에 근접 결 찰 분석 결과 사용 하 여 단백질 Isoforms의 Heterodimerization의 검출

JoVE Journal
Biochemistry
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Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

제자리에 근접 결 찰 분석 결과 사용 하 여 단백질 Isoforms의 Heterodimerization의 검출

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09:18 min

October 20, 2018

DOI: 10.3791/57755-v

Sofiia Karchugina¹, Jonathan Chernoff¹

¹Fox Chase Cancer Center

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여기, 우리가 근접 결 찰 분석 결과 (PLA)를 사용 하 여 높은 감도와 고정된 셀에 MST1/MST2 heterodimerization를 시각화 하는 방법을 보여 줍니다.

시상 근접 리깅 분석 또는 PLA에서 단백질, 부착 된 조직 및 세포 간의 상호 작용을 감지 할 수있는 기술입니다. 단백질 간의 연관성은 형질전환 발현 또는 추가 기술 없이 식별되고 정량화될 수 있다. 유일한 요구 사항은 DNA 올리고뉴클레오티드로 변형될 수 있는 특정 고효율 항체의 가용성입니다.

조직에서 MST1 및 MST2는 주로 활성 호모이머로 존재하지만, 온코겐 자극은 MST1 MST2 이종기의 수준을 증가시킬 수 있으며 이러한 이종성중무는 비활성이다. 관심있는 단백질에 대한 특정 프라이머 항체를 사용하여 배양한 다음, 특수 특이적 특이적 이차 항체는 각각 고유하고 짧고 무료 DNA 가닥에 연결되어 1 차 항체에 결합하기 위해 슬롯에 첨가됩니다. 문제의 단백질이 이성구화되면 1차 항체와 이차 항체가 모두 가까이 에 있을 것입니다.

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