Vivo에서 간세포 암 종 개발에 중간 엽 줄기 세포의 잠재력을 탐험

안녕하세요, 저는 줄기세포 및 재생의학과의 킹 압둘라 국제 의학 연구 센터의 알라 알샤레다 박사입니다. 오늘 우리는 cell sheet 기술을 사용하여 중간엽 줄기세포가 쥐 모델에서 간세포 암종의 발달에 미치는 영향을 시연할 것입니다. 안녕하세요, 저는 압둘라 알무바라크입니다.

저는 King Saud University의 실험 외과 및 동물 실험실에서 일하고 있습니다. 우리는 세포 시트를 이식 한 후 거부 반응을 피하기 위해 누드 쥐를 사용합니다. 이 다이어그램은 나체의 쥐에 대한 세포장 이식 절차를 보여줍니다.

이 연구에는 8주에서 12주 된 나체의 쥐가 사용될 것입니다. 먼저, 쥐를 잘라내고 메스를 사용하여 피부와 근육 사이를 7-10cm 간격으로 잘라 간을 노출시킨다. 세포 시트를 옮기려면 멸균 멤브레인을 사용하십시오.

세포판 위에 멤브레인을 놓아 수집합니다. 그런 다음 세포막이 있는 세포판을 간의 한쪽 엽 위에 놓습니다. 셀 시트 구조.

세포를 파종하기 전에 3.5cm 온도 반응형 UpCell 배양 접시에 희석되지 않은 FBS를 코팅합니다. FBS로 접시를 코팅하면 막층에서 세포의 성장을 지원하고 세포의 분해를 방지할 수 있습니다. 접시의 모든 표면을 덮으십시오.

산화탄소 5%와 공기 95%를 포함하는 가습한 대기에서 섭씨 37도에서 24시간 동안 접시를 배양합니다. 다음 날에는 여분의 FBS를 제거하고 접시를 실온에서 최소 1시간 동안 건조시킵니다. 최소 100만 개의 HepG2 암세포를 단독으로 또는 중간엽 줄기세포와 공동 배양하여 DMEM 배양 배지에 시딩합니다.

배지에는 10% FBS 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 보충되었습니다. 이 연구에서 사용된 암세포와 중간엽 줄기세포의 비율은 4:1입니다. 세포를 추가한 후 접시를 부드럽게 흔듭니다.

5%의 이산화탄소와 95%의 공기를 포함하는 가습된 분위기에서 섭씨 37도의 세포를 배양합니다. 셀 시트의 분리. 100% 세포 합류점에서 섭씨 37도의 인큐베이터에서 접시를 꺼냅니다.

이제 HepG2 암세포 시트를 실온에서 1시간 동안 배양하고, 중간엽 줄기세포와 공동 배양된 HepG2를 95%의 공기에서 5%의 이산화탄소를 포함하는 가습 분위기에서 섭씨 20도에서 30-40분 동안 배양합니다. 배양 시간 동안 세포 시트 박리를 위한 동물 절차를 시작합니다. 동물에 대한 모든 연구는 King Saud University 윤리 위원회의 승인을 받았습니다.

수술 절차를 수행합니다. 페달 철수 반사를 테스트하여 마취 깊이를 확인하십시오. 수술 부위를 요오드로 소독합니다.

이제 요오드가 함유된 두 번째 스크럽을 바른다. 절개 부위가 오염되지 않도록 멸균 된 드레이프로 동물을 덮으십시오. 살균된 메스를 사용하여 피부와 근육 사이를 7-10cm 크기로 절개하여 간을 노출시킵니다.

메스의 평평한 뒤쪽 가장자리로 복부 근육을 피부에서 분리합니다. 리네아 알바를 메스를 사용해 정중하게 찌르고 날카로운 가위로 상처를 늘린다. 쥐의 간에 세포판 이식.

배양 접시를 벤치 위로 부드럽게 두드려 표면에서 시트를 분리합니다. 시트 가장자리를 반원으로 긁어 접시 표면에서 셀 시트를 분리합니다. 이제 접시에서 모든 배양 배지를 부드럽게 제거합니다.

시트가 손상되지 않았는지 확인하고 그렇지 않으면 사용할 수 없습니다. 세포 시트를 수확하고 옮길 무균 멤브레인을 준비합니다. 따라서 먼저 멤브레인에 일반 식염수를 적신 다음 멸균 면봉으로 과도한 식염수를 제거합니다.

젖은 멤브레인을 세포 시트 위에 놓고 멤브레인과 세포 시트 사이에 기포가 생기지 않도록 합니다. 물질을 수집하기 위해 멤브레인과 세포 시트 위에 생리식염수 몇 방울을 떨어뜨립니다. 세포 시트가 멤브레인에 제대로 부착되었는지 확인하기 위해 멤브레인을 몇 초 동안 그대로 두었다가 수집합니다.

이제 이식을 위해 간을 준비합니다. 간 표면이 건조한지 확인하십시오. 세포판이 있는 막을 쥐 간의 한쪽 엽 위에 놓습니다.

멸균된 식염수 몇 방울을 떨어뜨려 세포막에서 세포판을 분리합니다. 멤브레인을 조심스럽게 제거하기 전에 5분 동안 기다립니다. 이 비디오에서 세포 시트가 간에 부착되어 있는 것을 볼 수 있습니다.

마지막으로 5개의 나일론 봉합사로 밑아래 근육과 피부 절개 부위를 봉합합니다. 절개 부위를 봉합한 후 베타딘으로 수술 부위를 소독합니다. 마취제를 벗고 머리를 들 때까지의 시간은 가변적이지만 일반적으로 5분에서 20분 사이입니다.

이 그림은 HepG2 세포장 이식 1개월 후 쥐의 간에 발생한 종양을 보여줍니다. 여기서, 종양은 HepG2 암세포와 골수 중간엽 줄기세포를 이식한 세포판을 이식한 후 개발되었습니다. 이 그림은 HepG2 암세포와 탯줄 중간엽 줄기세포로 만든 세포장 이식 후 쥐의 간에 발생한 가장 작은 종양인 반면, 이 그림은 세포장 이식 1개월 후 쥐의 간이 H와 E로 염색된 것을 보여줍니다.

여기서 A는 정상적인 쥐의 간세포를 나타내고, B는 암에 걸린 쥐의 간세포를 나타낸다. 결론. 따라서 이 비디오를 시청한 후에는 Cell Sheet 기술을 사용하여 누드 쥐에서 간세포 암종 모델을 개발할 수 있을 것입니다. 시청해 주셔서 감사합니다.