중요 사지 이혈증을 가진 Angioplasty 처리한 환자에 있는 현지 순환 단핵 전구 세포를 사용하여 절단을 예측합니다

혈관 성형술은 심각한 사지 허혈에서 혈류를 개선하지만 일부 환자는 여전히 사지 절단으로 진행됩니다. 전통적인 위험 요인 및 내인성 혈관 특징에 기반한 예후와 비교했을 때, 국소 MPC의 수는 내피 기능 장애 및 사지 절단과 관련된 임상 결과를 더 잘 예측할 수 있습니다. 국소 MPC의 수는 허혈, 심장 질환 및 하지 허혈과 같은 혈관 사건의 예후를 나타내는 유망한 지표이며, 위험 계층화 및 예방 집행에 잠재적으로 적용될 수 있습니다.

에두아르도 베라-고메즈(Eduardo Vera-Gomez), 알레한드로 에르난데스-파트리시오(Alejandro Hernandez-Patricio), 카롤리나 아란다-로드리게스(Carolina Aranda-Rodriguez), 후안 아리엘 구티에레즈-부엔디아(Juan Ariel Gutierrez-Buendia), 아친 수아 루이즈-에르난데스(Atzin Sua Ruiz-Hernandez), 마리오 안토니오 텔레즈-곤잘레스(Mario Antonio Tellez-Gonzalez), 가브리엘 알렉산드라 도밍게스-페레즈(Gabrielle Alexandra Dominguez-Perez)가 시연을 펼칠 예정이다. 실험적 신진대사 및 조직 재생 실험실의 박사 학위는 Gabrielle Hernandez-De Rubin과 Oscar Antonio Loman-Zuniga가 될 것입니다. 그리고 이들은 혈관 외과에서 왔습니다.

혈관성형술 전후 FMD를 확인하려면 혈관 선형 변환기를 사용하여 환자의 상완 동맥 직경을 측정합니다. 다음으로, 팔뚝의 측정 부위 위에 혈압계의 커프를 두르고, 수축기 혈압보다 50mm 높은 수은을 5 분 동안 수축기 혈압 위로 밀어 넣으십시오. 수축 후 60초 이내에 상완 동맥 직경을 다시 측정하고 방정식을 사용하여 FMD를 추정합니다.

사지 허혈의 임상적 중증도를 평가하기 위해, 러더퍼드 분류에 따라 선택한 사타구니 부위의 혈관에 18 게이지 바늘을 삽입하고 바늘 위에 주입기를 놓습니다. 유연한 가이드와이어를 도입기에 삽입하고 가이드를 6개의 프렌치 도입기로 교체합니다. 형광 투시 유도를 사용하여 조영제를 주입하여 동맥 궤적과 막힌 혈관 부위를 식별합니다.

0.014 프랑스식 항행 가이드와이어 2개와 0.014 프랑스식 지지 가이드와이어 2개를 선박에 삽입하고 가이드 와이어를 차단된 지점으로 전진시킵니다. 다음으로, 5 프렌치 카테터 1개, 3 프렌치 카테터 1개를 도입하고 혈관 폐색에 가장 가까운 부위에서 10ml의 혈액을 채취합니다. 샘플을 얼음 위에 놓고 가이드와이어를 다시 전진시킵니다.

가이드와이어가 제자리에 있으면 카테터 끝에 위치한 팽창식 풍선이 포함된 혈관 성형술 풍선 카테터를 삽입하고 혈관 성형술 풍선 카테터를 병변 부위로 전진시킵니다. 혈관 벽에 위치한 막고 있는 플라크에 풍선을 부풀리고 혈류가 회복되는지 확인합니다. 혈관 성형술을 시행한 후 30분 후에 혈관 블록에서 가장 가까운 부위에 카테터를 삽입하고 혈액 10ml를 채취합니다.

그런 다음 모든 가이드와이어를 제거하고 적절한 수술 후 관리를 제공합니다. 혈관 성형술 2주 후, Rutherford 분류에 따라 사지 허혈의 임상적 중증도, 휴식 통증 해결, 하혈 및 기능적 발 보존을 평가하고 좋지 않은 결과로 인해 큰 절단이 필요한 사례를 식별합니다. 채취 후 1시간 이내에 채취한 각 혈액 샘플 6ml를 새로운 15ml 튜브로 옮기고 PBS에서 1:1 비율로 샘플을 희석합니다.

3개의 시험관 각각에 2ml의 밀도 구배 매체를 추가하고, 각 튜브에 3/4 이하로 희석된 혈액의 동일한 부피 분취량 3개를 추가합니다. 밀도 구배 원심분리로 혈액 세포를 분리하고 피펫을 사용하여 결과 층의 계면 세포를 수집합니다. 각 샘플의 세포를 단일 15ml 튜브로 끌어당기고 세척당 2ml의 PBS로 각 샘플을 6번 세척합니다.

마지막 세척 후, 계수를 위해 샘플당 1ml의 PBS에 펠릿이 포함된 MPC를 다시 현탁시키고, 샘플당 5ml의 유세포 분석 튜브의 적절한 수에 튜브당 6개의 셀에 10을 곱한 1을 추가합니다. 원심분리를 통해 세포를 펠렛화하고 각 세포 샘플을 100마이크로리터의 관심 항체 칵테일에 10초 동안 다시 현탁시킨 후 빛으로부터 보호된 섭씨 4도에서 20분 동안 세포를 배양합니다. 배양이 끝나면 동형이 일치하는 대조 항체를 사용하여 분석을 위한 적절한 전방 및 측면 산란 게이트를 설정하고, 많은 수의 CD45 및 CD34 양성 세포가 포함된 튜브를 사용하여 NPC를 게이트합니다.

이중 양성 면역 표현형을 선택하려면 새로운 플롯을 생성하고 KDR, CD133 및 CD184 양성, CD34 양성, CD45 양성 세포를 게이트 식별한 다음 게이트를 통해 주요 MPC 하위 모집단을 식별합니다. 그런 다음 MPC의 수는 기준선 FMD 값, FMD의 혈관 성형술 후 델타 및 하지 절단이 필요한 환자의 비율과 상관 관계가 있을 수 있습니다. 이 대표적인 분석에서, 하지 혈관성형술 30일 후 CD45 양성, CD34 양성, KDR 양성 MPC의 기준선 수치는 FMD와 음의 상관관계를 보였습니다.

반면, 혈관성형술 후 CD45 양성, CD34 양성, CD133 양성, CD184 양성 MPC의 변화는 FMD 개선과 유의한 상관관계가 있었다. 사지 절단으로 발전한 환자에서 MPC CD45 양성, CD34 양성, KDR 양성 하위 집단의 기준선 수 증가와 혈관성형술 후 감소, CD45 양성, CD34 양성, CD133 양성, CD184 양성 세포의 혈관성형술 후 감소도 관찰되었으며, 혈관 접근 중에는 혈관 폐쇄에 가장 가까운 부위에서 혈액을 채취해야 합니다.