In Situ Nucleosome Assembly for Single-Molecule Correlative Force and Fluorescence Microscopy

단일 분자 기법은 염색질 시스템의 역학, 배위 및 구성을 연구하는 강력한 도구입니다. 따라서 연구자들은 항상 뉴클레오솜 기질을 생성하는 더 나은 방법을 찾고 있습니다. 여기에서는 단일 분자 상관력 및 형광 현미경에서 C2의 DNA를 가로질러 뉴클레오솜을 형성하는 프로토콜을 설명합니다.

일반적으로 뉴클레오솜 기질은 염 투석을 통해 강력한 포지셔닝 서열을 포함하는 DNA에 뉴클레오솜을 조립하여 만들어집니다. 이것은 장점이 있지만 인위적으로 안정적인 뉴클레오솜을 생성하고 시약이 많이 사용됩니다. 당사의 프로토콜은 특정 DNA 염기서열 없이 훨씬 적은 시약으로 단일 분자 상관력 및 형광 현미경 검사를 위한 뉴클레오솜 기질을 몇 분 내에 준비합니다.

이 프로토콜은 네이티브 DNA 염기서열에서 뉴클레오솜 조립을 가능하게 하고, 뉴클레오솜 밀도를 쉽게 조정할 수 있을 뿐만 아니라 준비 시간과 시약 사용을 줄일 수 있습니다. 또한 C2에서 뉴클레오솜 DNA 테더를 형성하면 실험 워크플로우가 더 간단해지고 내장된 단일 분자 시각화 및 조작의 편리함이 가능합니다. 균일하고 특정한 뉴클레오솜 위치 지정이 실험의 필수적인 부분이 아닌 경우, 우리의 발견은 과학자들이 단일 분자 수준에서 크로마틴과 그 채굴 단백질을 보다 효율적으로 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.

시간과 자원이 절약되면 추가 변수와 조건을 더 자세히 조사하기 위해 더 많은 실험을 수행할 수 있습니다. 우리가 현재 생각하고 있는 적용 가능한 연구 분야에는 히스톤 변이체 및 기타 번역 후 변형에 의해 조절되는 염색질 역학이 포함됩니다. 우리는 또한 다른 염색질 결합 단백질의 생물물리학적 관여 및 동역학에 대해서도 생각하고 있습니다.

마지막으로, 생체 분자 응축과 같은 뉴클레오솜 중심의 고차원 조립 공정에 대해서도 생각하고 있습니다.