June 13th, 2025
당사는 제브라피시 배아에서 16 PAH의 내부 수준을 평가하기 위해 수정된 QuEChERS-HPLC 방법을 개발했습니다.
이 연구는 EOM에 노출된 제브라피쉬 배아의 PAH를 정량화하기 위해 수정된 QuEChERS-HPLC 방법을 개발하여 배아의 질량 크기와 생물학적 매트릭스의 복잡성으로 인해 내부 PAH 수준을 측정하는 데 있어 기술적 문제로 인한 현재 격차를 해결하는 것을 목표로 합니다. 신뢰할 수 있는 결과를 얻으려면 그룹당 200개의 배아가 필요하므로 실질적인 과제가 있습니다. HPLC와 형광 검출기를 결합하면 분석법의 감도를 더욱 향상시킬 수 있습니다. 다른 기술과 비교하여 이 수정된 QuEChERS-HPLC 방법은 시료 중단 시간을 크게 줄이고 EOM에 노출된 제브라피쉬 배아의 16 PAH 수준을 분석하기 위한 신속하고 효율적인 접근 방식을 제공합니다.
[해설자] 시작하려면 수정 후 72시간에 인큐베이터에서 배아가 들어 있는 접시를 꺼내 QuEChERS 샘플을 준비합니다. 배아를 순수한 물로 세 번 씻으십시오. 배아를 1.5밀리리터 튜브로 옮기고 과도한 물을 제거합니다. 튜브를 섭씨 영하 80도의 냉동고에 30분 동안 넣어 배아를 동결건조합니다. 동결건조 후 유리봉을 사용하여 배아를 분쇄합니다. 25마이크로리터의 16 다환 방향족 탄화수소(PAH)를 혼합하여 DMSO 대조군에 혼합 표준 용액을 첨가하여 스파이크 회수율을 테스트합니다. 그런 다음 1밀리리터의 n-헥산을 넣고 30초 동안 소용돌이치게 합니다. 섭씨 35도에서 30 분 동안 혼합물을 초음파 처리합니다. 이제 샘플을 7,000g에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 새 튜브로 옮깁니다. 수집된 상청액을 섭씨 35도 수조에서 질소 흐름 하에서 건조되도록 증발시킵니다. 아세토니트릴 1밀리리터를 넣고 30초 동안 소용돌이치게 합니다. 1차 2차 아민 10mg, 황산마그네슘 45mg, C18 패킹 15mg을 샘플에 첨가한 다음 30초 동안 소용돌이치게 합니다. 7,000g에서 5분 동안 원심분리하고 상청액을 새 튜브로 옮깁니다. 질소 하에서 상청액을 0.5밀리리터로 증발시키고 0.22마이크로미터 미세 다공성 멤브레인을 통해 샘플을 여과합니다. 아세토니트릴을 사용하여 16 PAH 혼합 표준물질에 대해 밀리리터당 1에서 500나노그램에 이르는 일련의 작업 용액을 준비합니다. 아세토니트릴 또는 물-이동상을 사용하여 액체 크로마토그래프에 20마이크로리터의 샘플 용액을 주입하고 화면에 표시된 용출 절차를 따릅니다. x축에 표준 작업 용액의 질량 농도와 y축에 해당 피크 면적이 있는 표준 곡선을 그려 밀리리터당 5나노그램에서 밀리리터당 500나노그램까지의 범위를 포함합니다. 정제된 샘플을 형광 검출기 (FLD) 및 다이오드 어레이 검출기 (DAD)가 장착 된 액체 크로마토그래프에 주입합니다. 머무름 시간을 비교하여 PAH의 존재를 식별합니다. 피크 면적을 측정하여 농도를 결정합니다. 마지막으로 측정된 질량 농도를 기준으로 16가지 PAH의 내부 농도를 계산합니다. 수정 후 72시간에 제브라피쉬 배아에서 다환 방향족 탄화수소(PAH)의 농도가 이 표에 나와 있습니다. 추출 가능한 유기물(EOM)이 노출된 제브라피쉬 배아에서 6개의 PAH가 성공적으로 검출되었습니다. 대조적으로, DSMO 대조군 샘플에서는 EOM 샘플보다 현저히 낮은 수준으로 2개의 PAH만 확인되었습니다.
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이 연구는 제브라피쉬 배아의 다환 방향족 탄화수소(PAHs)를 정량화하기 위한 수정된 QuEChERS-HPLC 방법을 제시합니다. 이 방법은 배아의 작은 크기와 복잡한 생물학적 매트릭스로 인한 내부 PAH 수준 측정의 어려움을 해결합니다.
Quantitative detection of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in small, complex biological matrices is a critical challenge in early toxicology and environmental risk assessment workflows. The modified QuEChERS-HPLC method enables sensitive, reproducible measurement of internal PAH levels in zebrafish embryos, supporting mechanistic de-risking and predictive confidence in developmental toxicity studies. This capability strengthens translational continuity from environmental exposure models to preclinical safety evaluation in biopharma pipelines.
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling robust quantification of PAHs in zebrafish embryos, informing both mechanistic studies and translational toxicology workflows.