Name: Ontwikkeling van een op microfluïdica gebaseerde benadering voor het onderzoeken van de mechanica van microtubuli-polymeren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Ontdek een microfluïdische methode voor het bestuderen van microtubuli-mechanica met behulp van PDMS-gieten en stromingscontrole. Deze aanpak verbetert de doorvoer en minimaliseert luchtbellen in cytoskeletonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.6 mL microcentrifuge tubes (clear)</td><td>Elke merk</td><td></td><td>Laag vasthoudend type heeft de voorkeur</td></tr><tr><td>1.5 mL microcentrifuge tubes (clear)</td><td>Elke merk</td><td></td><td>Laag vasthoudend type heeft de voorkeur</td></tr><tr><td>1.5 mm standaard biopsie punch</td><td>Integra LifeSciences</td><td>33-31A-P/25</td><td></td></tr><tr><td>100x/1.49 numerieke apertuur TIRF objectief</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22 x 22 mm glazen dekglasjes</td><td>ThorLabs</td><td>CG15CH</td><td></td></tr><tr><td>3" enkelzijdig gepolijste siliciumwafers</td><td>University Wafer</td><td>447</td><td></td></tr><tr><td>4" Petri schaal</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>450 &micro;L, Open-Top Thinwall Ultra-Clear Tube</td><td>Beckman Coulter, Inc.</td><td>345843</td><td>Verwezen naar als 'airfuge tube' in het protocol</td></tr><tr><td>488-, 561, en 640-nm solid state lasers</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>A-95 Vaste-Hoek Rotor</td><td>Beckman Coulter, Inc.</td><td>347595</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Airfuge Air-Driven Ultracentrifuge</td><td>Beckman Coulter, Inc.</td><td>347854</td><td>Verwezen naar als 'airfuge' in het protocol</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Microscale Protein Labeling Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A30006</td><td></td></tr><tr><td>Aluminiumfolie</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Andor iXon Ultra EM-CCD</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Andor NEO sCMOS</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AutoCAD</td><td>Autodesk</td><td></td><td>Generieke versies kunnen worden gebruikt</td></tr><tr><td>Bovine brain unlabeled tubulin (gezuiverd)</td><td>N/A</td><td></td><td>Gemaakt in huis, maar kan worden gekocht</td></tr><tr><td>Caseïne</td><td>MilliporeSigma</td><td>C7078</td><td></td></tr><tr><td>Catalase</td><td>MilliporeSigma</td><td>C9322</td><td></td></tr><tr><td>Clean Dry Air (CDA) (onder druk staand gas)</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gedrukte luchtvoorziening</td><td>Elke merk</td><td></td><td>Verbindt met de microfluïdische stroomregelaar</td></tr><tr><td>COMSOL Multiphysics software</td><td>COMSOL, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aangepaste messing stagesteun</td><td>N/A</td><td></td><td>Gemaakt in huis om onze 22 mm x 22 mm dekglasjes op de microscoop te passen</td></tr><tr><td>De-ionized water</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Droogkast</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-glucose</td><td>MilliporeSigma</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MilliporeSigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Elveflow Smart Interface (ESI) software</td><td>Elveflow</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flangeless PFA fittings met ETFE &frac14;&rdquo;-28 tot 1/16&rdquo; buitendiameter ferrules&nbsp;</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>CIL-XP-245X</td><td>Gebruikt om de slangen van de micrewtube bronvialen naar de stroomsonde via het onder druk staande reservoirrek te verbinden</td></tr><tr><td>Fluiwell 4-Channel 2 mL Low Pressure</td><td>Fluigent</td><td>14002001</td><td>Gebruikt om het stroomregelsysteem naar de micrewtubes te verbinden. Ook verwezen naar als 'onder druk staand reservoirrek'</td></tr><tr><td>Afzuigkap</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glucose oxidase</td><td>MilliporeSigma</td><td>G6125</td><td></td></tr><tr><td>GMPCPP</td><td>Jena Bioscience</td><td>NU-405L</td><td></td></tr><tr><td>Guanosine trifosfaat (GTP)</td><td>MilliporeSigma</td><td>G8877</td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HS-625 hoge snelheid emissie filterwiel</td><td>Finger Lakes Instrumentation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ software</td><td>N/A</td><td></td><td>Open access</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isopropyl alcohol</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Karl Suss MA-6 masker aligner</td><td>SUSS MicroTec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Magnesium chloride</td><td>MilliporeSigma</td><td>1.05833</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB software</td><td>MathWorks</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MEGAPOSIT SPR 220 7.0 fotoresist</td><td>Dow, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microfluidic Fittings 6-40 naar 1/4"-28 Adapters Kit</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>LVF-KFI-08</td><td>Gebruikt om de slangen van de micrewtube bronvialen naar de stroomsonde via het onder druk staande reservoirrek (Fluiwell rek) te verbinden</td></tr><tr><td>Microfluidic Fittings Female Luer Lock Adapter Kit</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>LVF-KFI-04</td><td>Gebruikt om de spuit op de slang aan te sluiten</td></tr><tr><td>Microfluidic stroomregelaar</td><td>Elveflow</td><td>OB1 MK3+</td><td></td></tr><tr><td>Microfluidic stroomsonde</td><td>Elveflow</td><td>MFS3</td><td>Deze stroomsonde heeft een bereik van 0-80 &mu;L&nbsp;</td></tr><tr><td>MICROPOSIT MF-319 ontwikkelaar</td><td>Dow, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements software</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stikstof (onder druk staand gas)</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objectief verwarming</td><td>Tokai Hit</td><td></td><td></td></tr><tr><td>One-Piece Fingertight 10-32 Coned Fitting voor 1/16" OD Tubing&nbsp;</td><td>Darwin Microfluidics</td><td>CIL-F-120X</td><td>Gebruikt om de spuit op de slang aan te sluiten</td></tr><tr><td>Paclitaxel (Taxol)</td><td>Tocris Bioscience</td><td>1097</td><td></td></tr><tr><td>Fotolithografie maskers</td><td>N/A</td><td></td><td>Gemaakt door een externe partij volgens onze ontwerpen</td></tr><tr><td>PIPES</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>172615000</td><td></td></tr><tr><td>Plasma cleaner</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-32G</td><td></td></tr><tr><td>Plasma flowmeter systeem</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-FMG</td><td>Integreert met plasma cleaner om flow control van onder druk staand gas mogelijk te maken</td></tr><tr><td>Kunststof bulb pipet</td><td>Elke merk</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>MilliporeSigma</td><td>P2443</td><td>Verwezen naar als 'poloxomer 407' in het protocol</td></tr><tr><td>Kaliumchloride</td><td>Research Products International</td><td>P41000</td><td></td></tr><tr><td>Saint Gobain Performance Plastics&nbsp;Tube Tygon.020 ID</td><td>

ontwikkeling van een op microfluïdica gebaseerde benadering voor het onderzoeken van de mechanica van microtubuli-polymeren

Development of a Microfluidics-Based Approach for Investigating Microtubule Polymer Mechanics

Ontwikkeling van een op microfluïdica gebaseerde benadering voor het onderzoeken van de mechanica van microtubuli-polymeren

In this protocol, we describe the design and fabrication of a microfluidic device developed for the investigation of microtubule polymer mechanics. The ...

development-microfluidics-based-approach-for-investigating

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

We presenteren een procedure voor het vormen van een poly (ethyleenglycol) zelf-geassembleerde monolaag (PEG-SAM) op een silicium substraat met gouden micro-elektroden. De PEG-SAM is gevormd in een enkele stap en voorkomt biofouling op silicium en goud oppervlakken. Elektroforese wordt dan gebruikt voor patronen biomoleculen naar de nanoschaal.

Antifouling zelf-geassembleerde monolagen op micro-elektroden voor Patterning Biomoleculen

Een methode om de persistentielengte of buigstijfheid van biopolymeren meten beschreven. De methode gebruikt een kinesine aangedreven microtubule gliding assay experimenteel bepalen de persistentielengte van individuele microtubuli en is aanpasbaar aan actine gebaseerde assays glijden.

Buigstijfheid Metingen van Biopolymeren gebruik Zweefvliegen Assays

Microtubules zijn inherent instabiel polymeren en hun schakelen tussen groei en bakvet stochastische en moeilijk te controleren. Hier beschrijven we protocollen gebruiken gesegmenteerde microtubuli met photoablatable stabiliserende caps. Depolymerisatie van gesegmenteerde microtubuli kan worden geactiveerd met een hoge temporele en ruimtelijke resolutie, waardoor het bijstaan ​​van de analyse van bewegingen met de demontage uiteinden van microtubuli.

Voorbereiding van Segmented Microtubules om Motions Gedreven door het demonteren uiteinden van microtubuli Studie

Gist is een voordelige model voor het bestuderen van de dynamica van microtubuli in vivo vanwege de krachtige genetica en de eenvoud van het microtubule-cytoskelet. Het volgende protocol wordt beschreven hoe om te transformeren en cultuur gistcellen, verwerven confocale microscopie afbeeldingen en kwantitatief te analyseren dynamiek van microtubuli in levende gistcellen.

Hoge-resolutie beeldvorming en analyse van individuele Astral dynamiek van microtubuli in gist

Hier presenteren we een robuuste en gedetailleerde methode van microtubulus dynamica analyse in cellen gesynchroniseerd in tijdens met behulp van Live-cel spinnen schijf confocale microscopie en MATLAB gebaseerde beeldverwerking.

Meting van de microtubulus dynamiek door draaiende schijf microscopie in monopolaire mitotische spindels

Hier wordt een op TIRF-microscopie gebaseerde in vitro reconstitutietest gepresenteerd om tegelijkertijd de dynamiek van twee microtubulipopulaties te kwantificeren en te vergelijken. Er wordt een methode beschreven om tegelijkertijd de collectieve activiteit van meerdere microtubule-geassocieerde eiwitten op verknoopte microtubulibundels en enkele microtubuli te bekijken.

Gelijktijdige visualisatie van de dynamica van crosslinked en enkele microtubuli in vitro door TIRF-microscopie

We presenteren een protocol voor het implementeren van interferentie-reflectiemicroscopie en totaal-interne-reflectie-fluorescentiemicroscopie voor de gelijktijdige beeldvorming van dynamische microtubuli en fluorescerend gelabelde microtubuli-geassocieerde eiwitten.

Gelijktijdige interferentiereflectie en totale interne reflectie fluorescentiemicroscopie voor beeldvorming van dynamische microtubuli en bijbehorende eiwitten

Hier presenteren we een protocol voor het reconstitueren van microtubulibundels in vitro en het direct kwantificeren van de krachten die erin worden uitgeoefend met behulp van gelijktijdige optische vangmethoden en totale interne reflectiefluorescentiemicroscopie. Deze test maakt het mogelijk om op nanoschaal de krachten en verplaatsingen te meten die worden gegenereerd door eiwitensembles binnen actieve microtubulinetwerken.

Direct meten van krachten binnen gereconstitueerde actieve microtubulibundels

We presenteren protocollen voor eenvoudige actinefilamentmicrofluïdische assays, in combinatie met fluorescentiemicroscopie, waarmee men individuele actinefilamenten in realtime nauwkeurig kan volgen terwijl ze sequentieel worden blootgesteld aan verschillende eiwitoplossingen.

Microfluïdica en fluorescentiemicroscopie gebruiken om de assemblagedynamiek van single actinefilamenten en -bundels te bestuderen

Dit artikel presenteert een protocol voor de vorming van microtubule-assemblages in de vorm van tactoïden met behulp van MAP65, een plantaardige microtubule crosslinker, en PEG als een crowding agent.

Zelfassemblage van Microtubule Tactoids

Dit protocol is een gids voor het visualiseren van dynamische actine en microtubuli met behulp van een in vitro total internal fluorescence (TIRF) microscopie assay.

Visualisatie van actine en microtubulikoppelingsdynamiek in vitro door total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopie

Ontdek een microfluïdische methode voor het bestuderen van microtubuli-mechanica met behulp van PDMS-gieten en stromingscontrole. Deze aanpak verbetert de doorvoer en minimaliseert luchtbellen in cytoskeletonderzoek.

Ontwikkeling van een op microfluïdica gebaseerde benadering voor het onderzoeken van de mechanica van microtubuli-polymeren

Meer video's verkennen