Name: Efficiënte zuivering van elastine-achtige polypeptiden (ELPs) uit E. coli met behulp van een organisch-oplosmiddelgebaseerde extractie- en precipitatiemethode (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Leer een snelle organische-oplosmiddelmethode voor de zuivering van elastine-achtige polypeptiden uit Escherichia coli. Dit protocol behoudt fusie-eiwitactiviteit en biedt verbeterde endotoxinecontrole voor biomedische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Despanie, J., Dhandhukia, J. P., Hamm-Alvarez, S. F., MacKay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides%3A+therapeutic+applications+for+an+emerging+class+of+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides: therapeutic applications for an emerging class of nanomedicines.</a> J Control Release. 240, 93-108 (2016).</li>
<li>MacEwan, S. R., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in drug delivery.</a> J Control Release. 190, 314-330 (2014).</li>
<li>Jenkins, I. C., Milligan, J. J., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+encoded+elastin-like+polypeptides+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Genetically encoded elastin-like polypeptides for drug delivery.</a> Adv Healthc Mater. 10 (13), e2100209(2021).</li>
<li>Ju, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targeting+of+immunosuppressants+using+a+bifunctional+elastin-like+polypeptide%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular targeting of immunosuppressants using a bifunctional elastin-like polypeptide.</a> Bioconjug Chem. 30 (9), 2358-2372 (2019).</li>
<li>Nettles, D. L., Chilkoti, A., Setton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 62 (15), 1479-1485 (2010).</li>
<li>Meyer, D. E., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+recombinant+proteins+by+fusion+with+thermally+responsive+polypeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Purification of recombinant proteins by fusion with thermally responsive polypeptides.</a> Nat Biotechnol. 17 (11), 1112-1115 (1999).</li>
<li>VerHeul, R., Sweet, C., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simple+purification+of+elastin-like+polypeptides+directly+from+whole+cells+and+cell+lysates+by+organic+solvent+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and simple purification of elastin-like polypeptides directly from whole cells and cell lysates by organic solvent extraction.</a> Biomater Sci. 6 (4), 863-876 (2018).</li>
<li>Sweet, C., Aayush, A., Readnour, L., Solomon, K. V., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+fast+organic+extraction-precipitation+method+for+improved+purification+of+elastin-like+polypeptides+that+is+independent+of+sequence+and+molecular+weight%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of a fast organic extraction-precipitation method for improved purification of elastin-like polypeptides that is independent of sequence and molecular weight.</a> Biomacromolecules. 22 (5), 1990-1998 (1990).</li>
<li>Darji, S., Aayush, A., Estes, K. M., Strock, J. D., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+mechanism+of+elastin-like+polypeptide-enzyme+fusion+stabilization+in+organic+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Unravelling the mechanism of elastin-like polypeptide-enzyme fusion stabilization in organic solvents.</a> Biomacromolecules. 25 (1), 272-281 (2024).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+chemistry+of+biological+free+energy+transduction+as+demonstrated+by+elastic+protein-based+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Physical chemistry of biological free energy transduction as demonstrated by elastic protein-based polymers.</a> J Phys Chem B. 101 (51), 11007-11028 (1997).</li>
<li>Guo, Y., Liu, S., Jing, D., Liu, N., Luo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+elastin-like+polypeptides+and+their+applications+in+drug+delivery+system+and+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">The construction of elastin-like polypeptides and their applications in drug delivery system and tissue repair.</a> J Nanobiotechnology. 21, 418(2023).</li>
<li>Yi, A., Sim, D., Lee, S. -B., Sarangthem, V., Park, R. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bioengineered+elastin-like+polypeptide-based+system+for+targeted+gene+delivery+in+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Biosyst%22%5BJournal%5D)">Application of bioengineered elastin-like polypeptide-based system for targeted gene delivery in tumor cells.</a> Biomater Biosyst. 6, 100050(2022).</li>
<li>Clement, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+the+recombinant+expression+and+chemical+synthesis+of+a+short+cysteine-rich+insecticidal+spider+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Venom+Anim+Toxins+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison between the recombinant expression and chemical synthesis of a short cysteine-rich insecticidal spider peptide.</a> J Venom Anim Toxins Trop Dis. 21, 19(2015).</li>
<li>Miranda, L. P., Alewood, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+chemical+synthesis+of+peptides+and+small+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accelerated chemical synthesis of peptides and small proteins.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (4), 1181-1186 (1999).</li>
<li>Eweje, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+protein+nanoparticles+for+cytosolic+delivery+of+nucleic+acids+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Self-assembling protein nanoparticles for cytosolic delivery of nucleic acids and proteins.</a> Nat Biotechnol. , (2025).</li>
<li>Hassouneh, W., Christensen, T., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides+as+a+purification+tag+for+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides as a purification tag for recombinant proteins.</a> Curr Protoc Protein Sci. 6 (11), 1-16 (2010).</li>
<li>Yakhnin, A. V., Vinokurov, L. M., Surin, A. K., Alakhov, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+fluorescent+protein+purification+by+organic+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Green fluorescent protein purification by organic extraction.</a> Protein Expr Purif. 14 (3), 382-386 (1998).</li>
<li>Aayush, A., Darji, S., Estes, K. M., Yeh, E., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+elastin-like+polypeptide-based+nucleic+acid+delivery+system+targeted+to+EGFR%2B+bladder+cancer+cells+using+a+layer-by-layer+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of an elastin-like polypeptide-based nucleic acid delivery system targeted to EGFR+ bladder cancer cells using a layer-by-layer approach.</a> Biomacromolecules. 25 (9), 5729-5744 (2024).</li>
<li>Christensen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+order+controls+expression+level+and+activity+of+elastin-like+polypeptide+fusion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Fusion order controls expression level and activity of elastin-like polypeptide fusion proteins.</a> Protein Sci. 18 (7), 1377-1387 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0710</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>30% Acrylamide/Bis-acrylamide</td><td>TCI</td><td>A3218</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Fisher Scientific</td><td>A949</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>Acetonitril</td><td>Fisher Scientific</td><td>A996</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>Gold Bio- Gold Biotechnology</td><td>A-301-25</td><td>Antibioticum</td></tr><tr><td>APS (Ammonium Persulfaat)</td><td>Bio-Rad</td><td>1610700</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Butanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>L13171</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP118-500</td><td>Lysis Buffer Component</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>UN1170</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>Ethylacetaat</td><td>Fisher Scientific</td><td>E195</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Research Products International</td><td>G22020-0.5</td><td>Terrific Broth (TB) Media Component</td></tr><tr><td>Zoutzuur</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144SI-212</td><td>Lysis Buffer Component</td></tr><tr><td>Instant Coomasie kleurstof</td><td>Abcam</td><td>ab119211</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Gold Bio- Gold Biotechnology</td><td>12481C25</td><td>Eiwitexpressie Component</td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A451-1</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>K2HPO4 (Kaliumfosfaat Monobasisch)</td><td>Wards' Science</td><td>470302-246</td><td>Onderdeel 2 Buffer Component</td></tr><tr><td>KH2PO4 (Kaliumfosfaat Dibasisch)</td><td>Wards' Science</td><td>470302-254</td><td>Onderdeel 2 Buffer Component</td></tr><tr><td>L-Proline</td><td>Research Products International</td><td>P5200-500.0</td><td>Terrific Broth (TB) Media Component</td></tr><tr><td>Lysozym</td><td>Gold Bio- Gold Biotechnology</td><td>L-040-1</td><td>Lysis Buffer Component</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A452</td><td>Organische oplosmiddel</td></tr><tr><td>Native Sample Buffer</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0738</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Protein Ladder</td><td>Gold Bio- Gold Biotechnology</td><td>P008-500</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Resolving Gel Buffer</td><td>Bio-Rad</td><td>1610798</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>J18220-36</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Natriumhydroxide</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td>Lysis Buffer Component</td></tr><tr><td>Stacking Gel Buffer</td><td>Bio-Rad</td><td>1610799</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>1610801</td><td>SDS-PAGE Component</td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP-152</td><td>Lysis Buffer Component</td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Research Products International</td><td>T60065-1000.0</td><td>Terrific Broth (TB) Media Component</td></tr><tr><td>Gistextract</td><td>Research Products International</td><td>Y20025-1000.0</td><td>Terrific Broth (TB) Media Component</td></tr></tbody></table>

efficiënte zuivering van elastine-achtige polypeptiden (elp's) uit e. coli met behulp van een organisch-oplosmiddelgebaseerde extractie- en precipitatiemethode

Efficient Purification of Elastin-Like Polypeptides (ELPs) from E. coli Using an Organic Solvent-based Extraction and Precipitation Method

Na het doorlopen van de laatste fasen van het protocol is de volgende stap het visualiseren van het extractie-neerslagresultaat met SDS-PAGE-analyse en Coomassie blauwkleuring. Wanneer er een lysisstap is vóór organische extractie, zou een opvallende ELP-band zichtbaar moeten zijn. In het geval van ELP-I-Cm2 verschijnt deze band bij 100 kDa (Figuur 3A).
Screening van verschillende combinaties van organische oplosmiddelen toonde variabele extractie-efficiënties aan...

Efficiënte zuivering van elastine-achtige polypeptiden (ELP's) uit E. coli met behulp van een organisch-oplosmiddelgebaseerde extractie- en precipitatiemethode

Elastin-like polypeptides (ELP) are engineered biopolymers built from repetitive pentapeptide sequences that mimic motifs found in mammalian tropoelastin. ...

efficient-purification-elastin-like-polypeptides-elps-from-e-coli

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

We beschrijven hier een protocol voor de zuivering van zeer actieve Hsp104, een hexamere AAA + eiwit van gist, die koppels ATP hydrolyse aan eiwit desaggregatie. Deze regeling maakt gebruik van een His6-gelabeld bouwen voor affiniteitszuivering...

Zuivering van Hsp104, een eiwit Disaggregase

In this video, we demonstrate reversed-phase high-performance liquid chromatography to purify peptides from a digested protein lysate mixture. These purified peptides are then lyophilized and stored for downstream applications. Analysis of peptides can help understand the mechanics involved in cellular signaling and cancer.

Peptide Purification: An RP-HPLC-based Technique to Extract Peptides from Digested Protein Lysates

Elastine-achtige polypeptiden zijn stimulus-responsieve biopolymeren met toepassingen variërend van recombinant eiwit zuivering naar drug delivery. Dit protocol beschrijft de zuivering en karakterisering van elastine-polypeptiden en hun peptide of eiwit fusies uit Escherichia coli met hun lagere kritische oplostemperatuur faseovergang gedrag als eenvoudig alternatief voor chromatografie.

Niet-chromatografische zuivering van recombinant elastine-achtige polypeptiden en hun Fusies met peptiden en eiwitten van<em&gt; Escherichia coli</em

Recombinante technologieën hebben materiaalontwerpers in staat gesteld om nieuwe kunstmatige eiwitten te creëren met aangepaste functionaliteit voor toepassingen in weefselengineering. Bijvoorbeeld, kunstmatige extracellulaire matrix-eiwitten kunnen worden ontworpen om structurele en biologische domeinen te bevatten die zijn afgeleid van natuurlijke ECM's. Hier beschrijven we de constructie en zuivering van aECM-eiwitten die elastine-achtige herhalingen bevatten.

Ontwerp en constructie van kunstmatige extracellulaire matrix (AECM) Eiwitten uit<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Voor Skin Tissue Engineering

Het protocol voorziet in een methodologie om aëroob korrelslib oplosbaar te maken met het oog op alginaat-achtige extracellulaire polymeren (ALE) uit te pakken.

Extractie van structurele extracellulaire polymere stoffen van aërobe korrelslib

Recombinant eiwit-engineered hydrogels zijn voordelig voor 3D-celkweek als ze toe voor volledige tunability van de ruggengraat van het polymeer, en dus de cel communicatie. Hier beschrijven we het proces van recombinante elastine-achtige EiwitReiniging en de toepassing ervan in 3D hydrogel cel inkapseling.

Productie van elastine-achtige eiwitten Hydrogels voor inkapselen en immunokleuring van cellen in 3D

Hier gepresenteerd zijn protocollen voor de creatie van peptide-gebaseerde kleine unilamellaire blaasjes in staat van groei. Om de vesiculo productie van het membraan peptide te vergemakkelijken, zijn deze blaasjes uitgerust met een transcriptie-vertaalsysteem en de peptide-encoding plasmide.

In Vesiculo synthese van peptide membraan precursoren voor autonome Vesicle groei

Op het snijvlak van organische en waterige oplosmiddelen assembleren op maat gemaakte amfifiele elastine-achtige eiwitten zich in complexe supramoleculaire structuren zoals blaasjes, vezels en coacervaten die worden geactiveerd door omgevingsparameters. De beschreven assemblageprotocollen leveren Op eiwitmembraan gebaseerde compartimenten (PMBC's) met tunable eigenschappen, waardoor de inkapseling van verschillende lading.

Geleid Assemblage van Elastin-achtige eiwitten in gedefinieerde supramoleculaire structuren en cargo-encapsulation in vitro

Bacteriën scheiden nanometergrote extracellulaire blaasjes (EV's) af die bioactieve biologische moleculen dragen. EV-onderzoek richt zich op het begrijpen van hun biogenese, rol in microbe-microbe en gastheer-microbe interacties en ziekte, evenals hun potentiële therapeutische toepassingen. Een workflow voor schaalbare isolatie van EV's van verschillende bacteriën wordt gepresenteerd om standaardisatie van EV-onderzoek te vergemakkelijken.

Schaalbare isolatie en zuivering van extracellulaire blaasjes van Escherichia coli en andere bacteriën

Het huidige protocol beschrijft eiwitprecipitatie op basis van oplosmiddelen onder gecontroleerde omstandigheden voor robuust en snel herstel en zuivering van proteoommonsters voorafgaand aan massaspectrometrie.

Organische eiwitprecipitatie op basis van oplosmiddelen voor robuuste proteoomzuivering vóór massaspectrometrie

Dit artikel beschrijft een methodologie voor het tot overexpressie brengen van recombinant Nsp15, een toxische nuclease, in een C41(DE3) expressiesysteem, gevolgd door zuivering van het gelabelde eiwit met behulp van affiniteits- en grootte-uitsluitingschromatografie. Deze protocollen kunnen worden aangepast voor andere uitdagende giftige eiwitten.

Overexpressie en zuivering van een toxische nuclease van Escherichia coli

Leer een snelle organische-oplosmiddelmethode voor de zuivering van elastine-achtige polypeptiden uit Escherichia coli. Dit protocol behoudt fusie-eiwitactiviteit en biedt verbeterde endotoxinecontrole voor biomedische toepassingen.

Efficiënte zuivering van elastine-achtige polypeptiden (ELPs) uit E. coli met behulp van een organisch-oplosmiddelgebaseerde extractie- en precipitatiemethode (Video) | JoVE Journal

Efficiënte zuivering van elastine-achtige polypeptiden (ELP's) uit E. coli met behulp van een organisch-oplosmiddelgebaseerde extractie- en precipitatiemethode

Meer video's verkennen