Zaprogramowana stymulacja elektryczna u myszy

Znieczulona mysz jest przyklejona do płyty grzewczej w pozycji leżącej. Prawa żyła szyjna jest oddzielana, a bliższy koniec żyły jest wiązany. Do żyły wprowadza się cewnik apolarny 1,1 French OC, a następnie cewnik jest wprowadzany do prawego przedsionka i prawej komory.

Na koniec dystalny koniec żyły jest wiązany, aby zabezpieczyć pozycję cewnika i zapobiec krwawieniu. Cześć, jestem Naali i pracuję w laboratorium doktora Zvera na Wydziale Fizjologii Molekularnej i Biofizyki w Baylor College of Medicine. Dzisiaj pokażemy Ci procedurę programowania stymulacji elektrycznej u myszy.

Używamy tej procedury w naszym laboratorium do badania indukowalnych arytmii u myszy. Więc zacznijmy. Przed zabiegiem kaniulacji i wprowadzenia cewnika użyj maszynki do strzyżenia włosów, aby zgolić sierść znieczulonej myszy od linii szyi do połowy klatki piersiowej.

Zdezynfekuj obszar operacyjny 10% jodowidonem. Umieść mysz w pozycji leżącej na plecach i przyklej jej kończyny do elektrod EKG Incorporated. W tablicy grzewczej zalecamy system, który zawiera sondę temperatury doodbytniczą podłączoną do poduszki grzewczej sterowanej przez system analizatora termicznego, tak aby temperatura ciała była utrzymywana na poziomie 37 plus minus jeden stopień Celsjusza.

Po potwierdzeniu przez uszczypnięcie holownicze, że mysz jest w pełni znieczulona, wykonaj półcalowe nacięcie po prawej stronie linii środkowej z końcem kodalnym na poziomie obojczyka. Oddziel tkankę podskórną, gruczoły ślinowe i tkanki limfatyczne przez rozwarstwienie. Aby uwidocznić prawą żyłę szyjną, zawiąż bliższy koniec żyły sześcioma szwami.

Umieść kolejny szew pod żyłą na dystalnym końcu wizualizowanego segmentu. Teraz rozpocznij komputerową akwizycję danych, aby zarejestrować powierzchniowe EKG. Podłączyć cewnik do zewnętrznego stymulatora w trybie nagrywania.

Następnie za pomocą mikronożyczek wykonaj małe nacięcie w kierunku podłużnym żyły, delikatnie pociągając za szew proksymalny. Aby utrzymać żyłę prosto, wsuń cewnik 1,1 French Octo puller przez żyłę do prawego przedsionka i komory. Prawidłowe położenie cewnika jest weryfikowane poprzez wizualizację przebiegów czterech elektrogramów wewnątrzsercowych na poziomie wierzchołka prawej komory, podstawy prawej komory, węzła komorowego przedsionka i prawego przedsionka, ostatecznie zawiązać szew dystalny w celu zabezpieczenia pozycji cewnika i zapobieżenia ewentualnemu krwawieniu z pobudki przedsionkowej.

Para elektrod znajdująca się wewnątrz przedsionka jest przełączana z trybu nagrywania na tryb stymulacji, podczas gdy pozostałe pary elektrod pozostają w trybie nagrywania. Aby określić, czy mysz ma zwiększoną podatność na arytmie przedsionków, wykonuje się zaprogramowaną stymulację elektryczną prawego przedsionka. Najpierw określ próg stymulacji przedsionków, stosując co najmniej 52-milisekundowe impulsy prądowe o różnych długościach cyklu podstawowego lub BCL, aby przetestować spójność wychwytywania bodźca.

BCL początkowego ciągu impulsów jest nieco niższy niż wewnętrzny BCL i zmniejsza się o 10 milisekund. Typowa amplituda prądu wymagana do wychwytywania bodźca wynosi od 100 do 200 mikroamperów. Po zastosowaniu 15-sekundowego ciągu stymulacji przedsionków przy BC wynoszącym 100 milisekund, zmierz czas regeneracji węzła zatokowego lub SNRT, który definiuje się jako odstęp czasu między ostatnim bodźcem w pociągu stymulacji a początkiem pierwszego spontanicznego uderzenia zatokowego.

Aby określić efektywny okres refrakcji przedsionków lub ERP, należy zastosować serię ciągów stymulacji przedsionków przy stałym BCLS, jeden z kilkoma krótszymi bodźcami przedwczesnymi, S dwa. Interwał S od jednego do S dwa jest stopniowo zmniejszany o dwie milisekundy w każdym pociągu stymulacji z 70 milisekund do 20 milisekund z okresem regeneracji wynoszącym co najmniej 30 sekund między każdym protokołem stymulacji. ERP A definiuje się jako najdłuższy interwał sprzężenia S jeden do S dwa dla przedsionków, które nie wygenerowały propagowanego dudnienia z S dwa.

Podobne zastosowanie ciągów stymulacji przedsionkowej i bodźców przedwczesnych stosuje się do określenia efektywnego okresu refrakcji AV węzła komorowego przedsionkowego NERP. AV NERP definiuje się jako najdłuższy interwał sprzężenia S jeden do S dwóch, w którym po przedwczesnej stymulacji dostarczonej do przedsionka następuje potencjał syczenia, ale nie zespół QRS. Indukowalność arytmii przedsionkowych, w tym migotania przedsionków, można badać przy użyciu protokołu stymulacji impulsów, w którym stosuje się serię dwusekundowych impulsów.

Pierwsza dwusekundowa seria ma długość cyklu lub CL wynoszącą 40 milisekund, a każda kolejna dwusekundowa seria ma CL o dwie milisekundy krótszą niż poprzednia seria, aż do ostatniej CL wynoszącej 20 milisekund. Po zakończeniu wszystkich protokołów stymulacji akwizycja danych zostanie zatrzymana. W przypadku badań z końcówką EP węzeł jest delikatnie rozluźniany, aby uwolnić cewnik.

Tutaj pokazujemy kilka reprezentatywnych powierzchniowych EKG i elektrogramów wewnątrzsercowych u myszy. To powierzchniowe EKG pokazuje regularny rytm zatokowy z częstotliwością około 540 uderzeń na minutę. Te kolejne cztery elektrogramy pokazują bipolarne zapisy elektrogramu wewnątrzsercowego na poziomie prawego przedsionka.

Węzeł komorowy przedsionkowy, podstawa prawej komory i wierzchołek prawej komory. Fala wewnątrzsercowa w zapisie elektrogramu na poziomie prawego przedsionka odpowiada fali P na powierzchni. Branża CCG. Załamek V na elektrogramie komorowym odpowiada załamkowi QRS na powierzchni CCG.

Następnie pokazujemy reprezentatywne powierzchniowe elektrogramy CCG i elektrogramy wewnątrzsercowe oraz mysz, u której wystąpiło migotanie przedsionków po pęknięciu przedsionków na powierzchni. CCG, interwał RR jest nieregularny i nie ma pozornych załamków P. Z drugiej strony elektrogram przedsionkowy ujawnia szybkie sygnały przedsionkowe, które są nieregularne, co jest zgodne z migotaniem przedsionków.

Elektrogram komorowy ma wolniejszą częstotliwość, podobną do powierzchniowych interwałów RR. Właśnie pokazaliśmy, jak wykonać program stymulacji elektrycznej u myszy, wykonując tę procedurę, ważne jest, aby pamiętać, aby uniknąć rozległego krwawienia i utrzymać temperaturę ciała w normalnym zakresie od 36 do 37 stopni. Ponadto należy starać się zminimalizować narażenie na Asof Florin, ponieważ ekspozycja na działanie leku o działaniu dłuższym niż dwie godziny na wyższe stężenie może zahamować czynność serca i układu oddechowego u myszy.

Dlatego zalecamy, aby wszystko zaczęło się komplikować w ciągu dwóch godzin. Więc to wszystko. Dziękuję za oglądanie i życzę powodzenia w eksperymentach.