JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:01 min. • April 30th, 2023
Wyhoduj pożądaną linię komórkową jako przylegającą monowarstwę 2D. Usunąć pożywkę hodowlaną i przemyć solą fizjologiczną buforowaną fosforanami lub PBS. Następnie dodaj trypsynę i inkubuj, podczas gdy komórki odrywają się od powierzchni kolby i stają się okrągłe. Dodaj świeże podłoże, aby zneutralizować trypsynę i zawiesić komórki. Przenieś mieszaninę do stożkowej probówki i użyj wirówki do granulowania komórek.
Zastąp supernatant świeżą pożywką i ponownie zawieś osad ogniwa. Użyj hemocytometru, aby policzyć liczbę komórek i obliczyć stężenie robocze. Następnie przenieś odpowiednią ilość mieszanki komórek na okrągłodenną płytkę studzienkową o bardzo niskiej przyczepności i inkubuj. Komórki osiadają na dnie i agregują się. Ostatecznie połączą się ze sobą i utworzą kompaktowy zespół komórek 3D, sferoidę.
W przykładowym protokole zobaczymy, jak wygenerować sferoidy 3D z linii komórkowej raka jelita grubego i jak obrazowanie na żywo jest stosowane do śledzenia ich powstawania. Zacznij od przemycia interesującej nas linii komórek raka jelita grubego pięcioma mililitrami PBS i usunięcia komórek z dna kolby 0,5 mililitra trypsyny przez pięć minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Po potwi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych