Przetwarzanie nóg owadów do mikroskopii fluorescencyjnej: metoda zachowania struktur nerwowo-mięśniowych do obrazowania
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 4:09 min. • April 30th, 2023
- Na początek zanurz znieczulone owady w 70% roztworze etanolu, aby zmniejszyć hydrofobowość naskórka. Następnie przemyć i przepuścić tkankę roztworem soli fizjologicznej buforowanym fosforanem zawierającym detergent przez co najmniej 30 minut, aby umożliwić penetrację tkanki podczas utrwalania.
Następnie usuń głowę i brzuch z klatki piersiowej. Użyj kleszczy, aby delikatnie wywrzeć nacisk na połączenie koksy i klatki piersiowej i odłącz nogę. Ostrożnie umieść nogi na noc w lodowatym 4% roztworze paraformaldehydu, aby mógł wniknąć w tkankę. Paraformaldehyd utrwala tkanki poprzez sieciowanie białek.
Następnie usuń roztwór utrwalający i kilkakrotnie przemyj tkankę solą fizjologiczną buforowaną fosforanem zawierającą detergent. Przed zamontowaniem umieść nogi w czystym lub lekko rozcieńczonym buforze montażowym na co najmniej jeden dzień, aby zapewnić wystarczająco dużo czasu, aby bufor dostał się do tkanki.
Na koniec zamontuj nogi w kropli podłoża montażowego. Użyj podkładki dystansowej między szkiełkiem mikroskopowym a szkiełkiem nakrywkowym, aby zapobiec uszkodzeniu preparatu, i zabezpiecz mocowanie lakierem do paznokci.
W poniższym przykładzie zobaczymy rozwarstwienie, utrwalenie
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych