JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:34 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od dodania agarozy E3 o średniej lub niskiej temperaturze topnienia i podgrzewania, aż agaroza całkowicie się rozpuści. Ostudzić agarozę do 37 stopni Celsjusza i dodać roztwór tricainy. Następnie znieczulij zarodki, dodając trikainę do szalki Petriego zawierającej zarodki w pożywce E3. Zakręć szalką Petriego, aby zebrać zarodki w środku.
Za pomocą pipety transferowej pobrać jeden zarodek z minimalną ilością pożywki. Trzymaj pipetę w pozycji pionowej i odbij zarodek, aby umieścić go na końcówce pipety. Teraz umieść zarodek w roztworze agarozy bez dodawania nadmiaru pożywki, co rozcieńczyłoby agarozę i zapobiegłoby żelowaniu. Delikatnie wymieszaj zarodek z agarozą i przenieś roztwór do dołka płytki obrazowej za pomocą pipety.
Umieść płytkę pod mikroskopem i za pomocą końcówki pipety ustaw zarodek w pożądanej orientacji. Gdy agaroza zastygnie, wlej na nią podłoże E3 zawierające trikainę, aby utrzymać nawodnienie agaru i zobrazować zarodek. W przykładowym protokole zamontujemy parabiotyczne zarodki danio pręgowanego do obrazowania i analizy.
Aby uzyskać obrazy zrośniętych zarodków, przygotuj 0,8% agarozę o niskiej temperaturze topnienia. Będąc jeszcze gorącym, podnieś jeden m
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych