Wizualizacja ekspresji białek w oparciu o CUBIC: procedura wizualizacji ekspresji białek w biopsjach skóry myszy o pełnej grubości

- Skóra jest złożonym narządem składającym się z różnych populacji komórek ułożonych w wielu warstwach. CUBIC, trójwymiarowa technika obrazowania oparta na oczyszczaniu tkanek, pomaga wizualizować wzorce ekspresji białek wewnątrz tych komórek skóry za pomocą biopsji całej skóry. Zacznij od wzięcia uśpionej myszy i usunięcia włosów z jej grzbietowej części szyi. Wytnij kawałek skóry i pokrój go na małe kawałki.

Zanurz kawałki w roztworze oczyszczającym CUBIC1 i inkubuj. Komórki skóry są nieprzezroczyste, ze względu na obecność chromoforów i lipidów, które powodują rozpraszanie światła. Substancje chemiczne zawarte w roztworze CUBIC usuwają te cząsteczki, zmniejszając w ten sposób rozpraszanie światła i sprawiając, że tkanka staje się przezroczysta.

Następnie potraktuj tkankę pożądanymi przeciwciałami pierwotnymi, które wiążą się specyficznie z docelowymi białkami wewnątrzkomórkowymi ulegającymi ekspresji w komórkach skóry. Ponadto należy leczyć fluorescencyjnie znakowanymi przeciwciałami drugorzędowymi, które wiążą się z kompleksami białkowo-pierwszorzędowymi przeciwciałami. Przeciwbarwić tkankę barwnikiem wiążącym DNA, który barwi jądro.

Na koniec zanurz próbkę w roztworze CUBIC2.