JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:15 min. • October 30th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową zawierającą genetycznie zmodyfikowane bakterie chorobotwórcze wyhodowane z różnymi związkami testowymi, wraz z kontrolami ujemnymi.
Bakterie są nosicielami plazmidu z genem kodującym białko zielonej fluorescencji lub GFP.
Promotor genu jest aktywowany przez białko, które reaguje na wewnątrzkomórkowe cykliczne stężenia di-GMP lub c-di-GMP.
Umieść płytkę w czytniku płytek.
Użyj kontroli ujemnej, która fluoryzuje maksymalnie ze względu na brak inhibitora c-di-GMP, aby dostosować ustawienia w celu optymalnego pomiaru sygnału fluorescencji.
Jeśli badany związek hamuje tworzenie c-di-GMP, wewnątrzkomórkowy poziom c-di-GMP zmniejsza się.
Obniżony poziom c-di-GMP wywołuje zmianę konformacyjną w białku, co prowadzi do represji promotora i niskiej ekspresji GFP, co skutkuje zmniejszoną fluorescencją.
Zmierz fluorescencję i przeanalizuj dane, aby zidentyfikować badane związki, które modulują wewnątrzkomórkowe poziomy c-di-GMP w bakteriach chorobotwórczych.
Około 30 minut przed pomiarem spektrofotometrycznym należy wstępnie ogrzać czytnik płytek do 37 stopni Celsjusza, aby uniknąć kondensacji. Przed czytaniem delikatnie zdejmij przepuszczającą powietrze uszczelkę pokrywy z p
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych