Ocena ruchliwości bakteryjnej za pomocą urządzenia mikrofluidycznego

Weźmy urządzenie mikrofluidyczne składające się z rurki wlotowej połączonej z komorą mikrofluidyczną wykonaną z porowatych kanałów umożliwiających ruch bakterii.

Komora jest połączona z komorą obserwacyjną, która jest podłączona do pompy strzykawkowej przez rurkę wylotową.

Nasyć komory buforem, aby usunąć wszelkie pęcherzyki powietrza.

Umieść urządzenie na stole mikroskopu i ustawij soczewkę obiektywu nad komorą obserwacyjną.

Dostosuj ustawienia mikroskopu, aby wyraźnie wizualizować poszczególne komórki bakteryjne.

Umieść rurkę wlotową w zawiesinie bakterii oznaczonych fluorescencją.

Rozpocznij przepływ, aby wciągnąć bakterie do komory mikrofluidycznej, gdzie przechodzą przez porowate kanały, by dotrzeć do komory obserwacyjnej.

Zrób zdjęcia komory obserwacyjnej w regularnych odstępach.

Generuj krzywą przełomową, która reprezentuje ułamek bakterii przechodzących przez porowatą macierz w czasie.

Wyjmij mikrofluidykę z próżni i umieść ją na stole mikroskopu. Użyj pompki strzykawkowej, aby nasycić ją buforem ruchliwości.

Za pomocą mikroskopii Brightfield lub kontrastu fazowego dostosuj powiększenie, aby zobaczyć poszczególne komórki bakteryjne i skupić się na środku kanału obserwacyjnego. Zmień ustawienia ścieżki światła na mikroskopię fluorescencyjną. Dostosuj ostrość poprzez przesunięcie i czas naświetlania aparatu, aby rozróżnić pojedyncze komórki bakteryjne, w tym przypadku 100 milisekund.

Następnie włóż rurkę wlotową do rurki dwumililitrowej zawierającej zawiesinę bakteryjną. Odwróć kierunek pompy i zacznij wycofywać zawieszenie z przepływem jednego mikrolitra na minutę.

Skanuj przekrój całego kanału obserwacyjnego, rejestrując obraz co minutę.