Wizualizacja infekcji dróg moczowych w modelu myszy z wykorzystaniem bioluminescencji

Zacznij od znieczulonej myszy i, używając cewnika, wstrzyknij zawiesinę bakterii patogennych do pęcherza moczowego.

Bakterie te przenoszą bioluminescencyjny operon, który umożliwia autonomiczną produkcję światła do śledzenia infekcji.

Wewnętrzna wyściółka pęcherza to wyspecjalizowany nabłonek, który oddziela lumen od tkanki leżącej pod spodem.

Bakteryjne białka adhezji wiążą się z receptorami glikoproteinowymi na powierzchni nabłonka gospodarza, wywołując endocytozę pośredniczoną przez receptory.

Zinternalizowane bakterie replikują się, tworząc gęste wewnątrzkomórkowe społeczności bakteryjne.

Bakterie wyrażają bioluminescencyjny operon, produkując enzym lucyferazowy oraz kompleks enzymatyczny syntetyzujący substrat lucyferazowy.

Lucyferaza utlenia podłoże, emitując światło widzialne.

Umieść mysz wewnątrz komory obrazującej i wychwyć sygnał bioluminescencyjny.

Wybierz interesujący obszar i określ intensywność bioluminescencji.

Monitoruj ten sygnał w czasie jako wskaźnik w czasie rzeczywistym obciążenia bakteriami i postępu infekcji.

Otwórz oprogramowanie do akwizycji BLI i kliknij Initialize w urządzeniu obrazującym, aby przetestować kamerę i system kontrolera sceny oraz schłodzić kamerę urządzenia charge-coupled do minus 90 stopni Celsjusza. Kliknij na Akwizycja, AutoSave do. Wybierz Luminescencję i Fotografuj. Sprawdź domyślne ustawienia luminescencji, ustawiając filtr wzbudzenia na Blok, a filtr emisji na Otwarte.

Ustaw czas naświetlania na automatyczny przy robieniu pierwszego zdjęcia. Dla pomiarów in vivo i jasnych sygnałów ustaw czas naświetlania na około 30 sekund. Zmniejsz czas naświetlania, jeśli pojawi się ostrzeżenie z powodu nasyconego obrazu.

Wybierz średnie binowanie, F/stop jedno i wybierz właściwe pole widzenia. Ustaw wysokość obiektu na 1 centymetr podczas obrazowania myszy. Obrazuj do 5 myszy jednocześnie i rozdziel zwierzęta za pomocą przegrody świetlnej, aby zapobiec odbiciom.

Zamknij drzwi i kliknij Przejmuj, aby rozpocząć sekwencję obrazowania. Następnie wypełnij szczegółowe informacje o eksperymencie. Wyjmij myszy z komory obrazowania i odłóż je do klatki. Sprawdź pełne powrót do zdrowia po znieczuleniu. Następnie odłóż klatki do wentylowanych regałów do następnego cyklu obrazowania.

Uruchom oprogramowanie do obrazowania i załaduj plik eksperymentalny, klikając na Przeglądaj. Użyj palety narzędzi, aby dostosować skalę kolorów obrazu. Użyj narzędzi ROI, aby narysować interesujący obszar na obrazie, upewniając się, że jest on wystarczająco duży, by objąć cały obszar i używając tych samych wymiarów dla wszystkich obrazów. Następnie kliknij na pomiar ROI, aby określić intensywność światła.