Gradientowe urządzenie mikroprzepływowe do biologii komórki

Nazywam się Jiang. Jestem specjalistą ds. plakatów na Harvardzie i MIT w dziedzinie zdrowia, nauki i technologii. Nazywam się Amir Manchi i jestem profesorem na wydziale nauk o zdrowiu i technologii na Harvardzie, MIT.

Ten slajd pokazuje schemat procesu tworzenia urządzenia, więc po prostu obracam powłokę SUA 50 na wierzchu pary silikonowej, a następnie nakładam maskę dalej na miejsce na wierzch pary silikonowej, a następnie naświetlam uuv i rozwijam. W końcu możemy uzyskać, położyć te podkładki na parze silikonowej. Następnie możemy po prostu rzucić PDMS, a następnie czołgać się i piec i do małego ciosu, a następnie możemy po prostu związać, dostarczyć ponad wiązanie między urządzeniem PDMS a glece prosto za pomocą plazmy tlenowej.

Okej, jesteśmy teraz w pomieszczeniu do mikrofabrykacji w laboratorium i zaczniemy od wykonania kilku warstw PDMS. To, co mam na myśli mówiąc o PDMS, właściwym terminem naukowym jest polimethyl suboxane i jest to polimer organiczny. Jest to najczęściej stosowany polimer organiczny na bazie krzemu.

W rzeczywistości jest to mieszanina dwóch różnych rzeczy, jest mieszaniną bazy elastomeru krzemowego, a także utwardzacza z elastomeru krzemowego. Tak więc stosunek wynosi 10 bazy i jeden utwardzacza. Potrzebujemy około 10 gramów bazy, więc odpowiednio potrzebujemy około jednego grama utwardzacza elastomerowego, a ja postaram się wymieszać tę bazę i utwardzacz, które można ze sobą nosić.

Użyję pipet. Więc teraz, gdy mieszanina jest gotowa, zamierzam wylać ją na wierzch płytki krzemowej. Chodzi więc o to, że te wafle krzemowe mają na sobie pewne wzory.

W rzeczywistości pomagają temu polimerowi PDMS uzyskać wzór, a my używamy tych wzorów, aby uzyskać kanały i rowki i/lub jakikolwiek inny wzór, którego potrzebujemy na tych polimerach. Następnym krokiem jest to, że ponieważ mamy dużo pęcherzyków w tej mieszance, spróbujemy umieścić ją w próżni, aby uniknąć tych pęcherzyków wewnątrz naszego polimeru. Zamierzam umieścić żele PDMS na płytce krzemowej w komorze próżniowej.

Zamierzam zamknąć komorę i zamierzam otworzyć próżnię. Po zniknięciu bąbelków, może około kilku minut, włożymy je na noc do piekarnika, który ma około 70 stopni Celsjusza, co sprawi, że stężeją. Wzorzec, na który chcę, żebyście zwrócili uwagę, to te trzy różne wojny rezerwowe w celu tworzenia gradientów, tak że będziemy mieli zerową koncentrację po jednej stronie i będziemy mieli określoną ilość koncentracji po tej stronie i będziemy poruszać się równomiernie w tym kierunku, a na drugim końcu zrobimy mały cios. który byłby naszym ujściem w tym przypadku.

Następnym krokiem jest wycięcie jednego z tych wzorów i przeniesienie go do naczynia patriotycznego, tak aby powierzchnie wzoru były skierowane do góry. Mam więc nadzieję, że widzisz trzy wloty i jeden wylot, które wyjaśniłem ci na tych wzorach. Użyjemy małych stempli do naszego wlotu, aby móc użyć rurki polietylenowej, a ja zamierzam użyć dużych stempli do mojego wylotu, aby mieć wojnę rezerwową.

Zaczniemy więc od pierwszego wlotu. Zamierzam zrobić cios, to samo z drugim, a także kolejny mały cios z trzecim. Ostatnim, ostatnim krokiem jest zrobienie dużego ciosu w gniazdku.

Więc kiedy skończymy, mamy warstwę A-P-D-M-S, która jest górną warstwą, a ja zamierzam użyć kolejnej warstwy szkła na dole. A te mikro preparaty będą moją dolną warstwą przy urządzeniach micro folic. Teraz jesteśmy w pomieszczeniu do mikrofabrykacji, a ja mam jedną warstwę szkła i jedną warstwę PDMS i chcę je ze sobą połączyć.

To, czego teraz będziemy używać, to maszyna zwana czyszczeniem plazmowym. To, co się wydarzy wewnątrz komory, to to, że plazma pomoże rozbić słaby balans powierzchni i zastąpić je wysoce reaktywnymi grupami chemicznymi, a także powierzchnia okaże się hydrofilowa. To, co się teraz stanie, to to, że wezmę formę PDMS, która była górną warstwą i miała kilka kanałów w środku, i wyjmę taśmę, którą położyłem wcześniej, aby zapobiec przyczepianiu się kurzu do naszej formy.

Zamierzam umieścić go w komorze. Następną rzeczą do zrobienia jest to, że mam warstwę szkła, która jest szkiełkiem mikroskopowym, a to będzie nasza dolna warstwa wewnątrz urządzenia. Więc zamierzam umieścić ten również w komorze.

I zamykam komorę do końca, gdy jest zamknięta, najpierw zasilanie, potem pompa, a potem musimy wrócić do tej maszyny za jakieś pięć minut. To, co zrobię, to to, że chcę wyłączyć maszynę. Więc najpierw wyłączam pompę, a następnie zasilanie i otwieram komorę.

Dźwięk ten jest w rzeczywistości spowodowany podciśnieniem, które zostało zastosowane podczas procesu wewnątrz komory. Wyjmuję więc różne warstwy i chcę je ze sobą połączyć. Ponieważ szkło jest dolną warstwą, wezmę je do lewej ręki i zamocuję, a następnie wezmę warstwę PDMS i umieszczę ją na wierzchu mojej warstwy szkła.

Ale ponieważ właściwie wzorce są teraz zwrócone do góry, w pewnym sensie odwrócę warstwę PDMS. Położę go na szkle po ściśnięciu ich razem. Są one bardzo łatwe do przyklejenia, a częścią zalet tego procesu obróbki plazmowej jest siła klejenia i trwałość.

Tak to wygląda na końcu. Więc znowu, to są nasze wloty, a to jest w moim wylocie i jesteśmy gotowi, aby przejść do następnego kroku. Gotowanie włókien wewnątrz urządzenia, a następnie w inkubatorze przez godzinę, a następnie po godzinie wyjmij próbkę SIM z inkubatora, a następnie umieść pokarm do hodowli ryb, a następnie przygotuj roztwór.

Aby stworzyć rozwiązanie EGF, po prostu umieściliśmy dwie pożywki hodowlane młyna jako Azure, tak jak po prostu umieściliśmy 15 nanogramów na EGF i 10 mikromolów 50 D, uruchamiając to rozwiązanie bardzo mocno, aby zobrazować gradient EGF w całym kanale. Następnie po prostu bierzemy dwa młyny, nośniki wirtualne i umieszczamy tutaj kolejne nośniki z dwoma młynami. Te dwa siedzenia tylko normalne kultury, normalny, normalny napar z kultur w urządzeniu.

Więc usuwam bańkę, podłączam ponownie, ta jest również bańką mobilną M, która znowu schodzi. A potem po prostu używam 15 nanogramów er EGF i 10 mikromolowych fi dextra i dwóch mil pożywki z wynosu, próbki do i wkładam strzykawkę, a potem wiesz, co to jest bąbelek. A potem tylko przełącznik rozwiązania, przełącznik z powrotem.

Roztwór wchodzi do strzykawki typu gazowego i kilkakrotnie popycha SH, aby usunąć pęcherzyk, roztwór strzykawki z całą zmianą dociera tu jako pierwszy, a następnie przełącza pręt i roztwór przez pręt trójdrożny i nie i nie rurkę i roztwór wychodzący z rurki. A następnie po zmieszaniu roztwór wypływa, możemy po prostu włożyć rurkę do urządzenia My Predict, a następnie wszystkie trzy roztwory są takie same. Możesz po prostu delikatnie podłączyć, podłączyć siatkę kanału infuzyjnego.

A więc w końcu dwójka to normalne media kulturowe. Jednym z nich są podłoża kulturowe z EGF i potwierdzenie profilu gradientowego EGF. To jest komórka w sieci, komórka w sieci.

Spowoduje to wylot komórki, a więc generowanie gradientu za pomocą trzech kanałów piasty, a następnie wygenerowanie gradu wewnątrz obszaru komórki. Więc zwykle to, czego chcę, robimy po prostu siedzenie w komórce, zawieszenie komórki, osadzanie wylotu, a następnie możemy po prostu delikatnie zassać siatkę, a następnie komórka przepływa przez obszar komórki, automatycznie siedzi i osadza powłokę, a następnie upewnia się, że komórka całkowicie się rozprzestrzenia. A po przygotowaniu, po upewnieniu się, że komórka całkowicie się rozprzestrzenia, możemy po prostu zacząć zaparzać, a następnie badać migrację komórek za pomocą urządzenia generującego falę radiową.