Badania przesiewowe śmierci komórki za pomocą barwienia DAPI: metoda szybkiego badania przesiewowego klonogennej śmierci komórek wywołanej podczerwienią w liniach komórek nowotworowych

Narażenie na promieniowanie jonizujące, takie jak promieniowanie rentgenowskie, może spowodować uszkodzenie DNA, ostatecznie prowadząc do śmierci komórki. Aby przebadać wpływ promieniowania jonizującego na profile śmierci komórki, zacznij od pobrania szalki hodowlanej zawierającej przylegające komórki rakowe umieszczonej na powierzchni szkiełka nakrywkowego.

Napromieniować szalkę hodowlaną promieniami rentgenowskimi przez żądany czas. Zabieg ten powoduje uszkodzenie DNA wewnątrz komórek. Następnie odessać zużytą pożywkę z naczynia hodowlanego i dodać odpowiedni utrwalacz. Roztwór ten przenika do komórek i blokuje składniki komórkowe na miejscu podczas kolejnych etapów barwienia.

Wyrzucić roztwór utrwalający. Usunąć szkiełko nakrywkowe zawierające komórki poddane działaniu promieniowania rentgenowskiego z naczynia hodowlanego. Odwróć szkiełko nakrywkowe i umieść je na powierzchni szkiełka podstawowego, nakładając na nie kroplę barwnika DAPI tak, aby komórki miały bezpośredni kontakt z DAPI.

Cząsteczki DAPI dostają się do jąder i wiążą się z miejscami DNA bogatymi w A-T. Teraz zwizualizuj komórki pod mikroskopem fluorescencyjnym. Jądra są niebieskie i wykazują wyraźną morfologię.

Kom