Izolacja komórek jednojądrzastych z mózgu myszy: technika wirowania w gradimencie gęstości do izolowania komórek jednojądrzastych rezydujących w mózgu

Komórki jednojądrzaste w mózgu, składające się z limfocytów i monocytów, odgrywają kluczową rolę w utrzymaniu funkcji mózgu i homeostazy.

Aby wyizolować te komórki jednojądrzaste, najpierw weź świeżo zebrany mózg myszy wypełniony solą fizjologiczną.

Perfuzja umożliwia usunięcie krwi i jej składników z naczyń krwionośnych, umożliwiając izolację komórek odpornościowych rezydujących w mózgu w kolejnych etapach.

Teraz przepłucz mózg odpowiednią pożywką, aby usunąć przylegające czerwone krwinki. Następnie po płukaniu mielenie mięsa, aby uzyskać małe kawałki tkanki.

Homogenizuj fragmenty tkanki, aby uzyskać zawiesinę pojedynczych komórek i fragmentów komórek.

Do tej zawiesiny należy następnie dodać schłodzone podłoże i odpowiednią pożywkę o gradientze gęstości w odpowiednich objętościach, aby utworzyć podłoże o gradiencie o niskiej gęstości.

Następnie dodaj określoną objętość ośrodka gradientowego o dużej gęstości; nośnik gradientowy o dużej gęstości tworzy oddzielną warstwę na dole, tworząc gradient o nieciągłej gęstości.

Odwirować zawiesinę przy dużej prędkości i niskiej temperaturze. Komórki jednojądrzaste zajmują granicę faz między dwiema warstwami mediów gradientu gęstości.

Odrzuć g