Binarna transformacja genów oparta na sztucznym wektorze chromosomowym u roślin Arabidopsis: technika generowania roślin transgenicznych z insercją pojedynczej kopii
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:09 min. • July 8th, 2025
Zacznij od roślin Arabidopsis z niedojrzałymi główkami kwiatowymi. Zanurz główki kwiatowe w zawiesinie komórek Agrobacterium zawierających T-DNA sklonowane za pomocą binarnego sztucznego chromosomu bakteryjnego lub BIBAC, wektora replikującego się zarówno w systemach E. coli, jak i Agrobacterium. Ten wektor binarny T-DNA może dostarczać duże transgeny, takie jak gen odporności na herbicydy i fluorescencyjne markery selekcyjne wraz z promotorem specyficznym dla nasion.
Gdy główki kwiatowe są nadal zanurzone, delikatnie poruszaj roślinami, aby zwiększyć ich kontakt z Agrobacterium. Dzięki swojej wrodzonej zdolności do infekowania roślin, Agrobacterium przenosi transgen do komórki kwiatowej. Gdy transgen wnika do komórki, przemieszcza się do jądra i łączy się z genomem rośliny.
Teraz owiń roślinę folią spożywczą i inkubuj w ciemności, aby zatrzymać wilgoć i poprawić transformację. Usuń folię i hoduj rośliny w warunkach fizjologicznych, aż wydadzą nasiona.
Następnie zbierz nasiona i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby wybrać transformanty. Teraz hoduj przekształcone nasiona w odpowiednich warunkach, aż do wykiełkowania. Spryskaj rośliny herbicydem i inkubuj.
Rośliny z wielok
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych