JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 3:23 min. • July 8th, 2025
Ligandy, takie jak jony metali, wiążą się niekowalencyjnie z określonym białkiem, tworząc kompleks jonowy białko-metal. To wiązanie zmienia ogólny ładunek białka, co pozwala na scharakteryzowanie tych kompleksów za pomocą elektroforezy kapilarnej o powinowactwie.
Na początek weź cienką, wstępnie kondycjonowaną szklaną kapilarnę z naładowanymi grupami silanolowymi na wewnętrznej powierzchni. Przepłukać kapilar roztworem EDTA. EDTA jest środkiem chelatującym, który usuwa wszelkie zanieczyszczenia jonami metali. Teraz hydrodynamicznie wstrzyknij roztwór próbki zawierający pożądane białko do kapilary z jej dodatniego końca lub anody.
Zastosuj wysokie napięcie, aby wytworzyć przepływ elektroosmotyczny, zmuszając białka w ich natywnej konformacji z nieodłącznymi ładunkami do przemieszczania się wewnątrz kapilary w kierunku katody. Rejestruj wzorzec migracji niezwiązanych białek z naczynia włosowatego.
Następnie wprowadź określony roztwór liganda do kapilary wraz z próbkami białek i zastosuj to samo napięcie. Wewnątrz kapilary cząsteczki liganda wiążą się niekowalencyjnie z białkiem docelowym, tworząc kompleksy.
Powoduje to zmianę konformacyjną w białkach, prowadząc do zmiany ich nieodłąc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych