Zbadaj zachowanie chemounikania u robaków transgenicznych za pomocą testu unikania osmotycznego

U nicieni neurony chemosensoryczne - ASH - mogą wyczuwać zmiany osmolarności w swoim otoczeniu spowodowane przez chemiczne repelenty. W odpowiedzi robaki te oddalają się od repelentów, co prowadzi do zachowania chemounikającego.

Nieprawidłowa agregacja białek w neuronach ASH może prowadzić do zmian w zachowaniu chemounikania.

Aby zbadać zachowanie unikania osmotycznego u robaków, zacznij od transgenicznych larw nicieni z agregatami białkowymi w neuronach ASH. Potraktuj nicienie związkami bioaktywnymi, które zmniejszają agregację białek i przywracają zachowanie unikające u niektórych robaków.

Przenieś leczone robaki na wstępnie przygotowaną, bezpokarmową płytkę pożywki, aby utrzymać je w stadium larwalnym. Na płytce znajduje się glicerol - substancja chemiczna o wysokiej sile osmotycznej - obecna w środku, tworząc barierę osmotyczną dzielącą płytkę na dwie strefy, normalną i pułapkę.

Uzupełnij strefę pułapki znieczuleniem, aby zatrzymać ruch robaków, które przekraczają barierę. Dodaj kroplę butanodionu do strefy pułapki, aby przyciągnąć wszystkie robaki, powodując, że ruszą w jej kierunku.

Robaki z agregacją białek nie są w stanie wyczuć stresu osmotycznego, przekroczyć linii bariery i zostać znieczulone w strefie pułapki. Robaki z przywróconym zachowaniem chemounikania odsuwają się od glicerolu i pozostają w normalnej strefie.

Liczba robaków w strefie normalnej koreluje ze skutecznością związków bioaktywnych w przywracaniu zachowania chemounikania.

W celu przeprowadzenia testu unikania osmotycznego podziel bezżywnościową płytkę NGM na strefy normalne i pułapkowe, tworząc 8-molową linię glicerolu pośrodku. Następnie rozprowadź 200-milimolową linię azydku sodu w odległości około 1 centymetra od linii glicerolu, aby sparaliżować nicienie przechodzące przez barierę glicerolową do strefy pułapki.

Przenieś około 200 nicieni każdy do normalnej strefy trzech powtórzonych płytek dla każdej grupy. Następnie dodaj kroplę 1% butanodionu do strefy pułapki, aby przyciągnąć nicienie. Natychmiast przykryj pokrywkę szalki Petriego i inkubuj w temperaturze 23 stopni Celsjusza przez 90 minut.

Oceń liczbę nicieni w obu strefach pod mikroskopem i oblicz wskaźnik unikania.