JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:53 min. • July 8th, 2025
Komórki Kupffera to makrofagi rezydentne zlokalizowane w sinusoidach wątroby, które pomagają chronić wątrobę przed infekcjami.
Aby wyizolować mysie komórki Kupffera, weź świeżo zebraną perfundowaną wątrobę myszy w naczyniu zawierającym podłoże. Etap perfuzji wątroby z kolagenazą trawi macierz zewnątrzkomórkową, powodując dysocjację komórek wątroby.
Rozerwij torebkę wątroby, aby uwolnić zdysocjowane komórki wątroby, w tym komórki miąższowe, PC i komórki niemiąższowe, NPC, w tym komórki Kupffera, komórki śródbłonka, komórki gwiaździste i pozostałe erytrocyty.
Filtruj, aby usunąć zanieczyszczenia. Przeprowadzić wirowanie różnicowe przy niskiej prędkości na filtracie, aby selektywnie osadzać komputery. Zebrać supernatant zawierający NPC. Odwirować w celu zagęszczenia komórek.
Ponownie zawiesić komórki w pożywce i ułożyć warstwę na nieciągłym izotonicznym gradiencie gęstości z dwiema warstwami pożywki gradientowej o różnej gęstości. Podczas wirowania komórki rozdzielają się na podstawie ich gęstości w stosunku do podłoża gradientowego.
Zbierz wzbogaconą warstwę NPC na skrzyżowaniu warstwy gradientu. Przenieść do probówki zawierającej podłoże i odwirować. Umieść ponownie zawieszonych NPC
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych