JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:19 min. • July 8th, 2025
W komórkach odpornościowych kaspaza-1, kaspaza zapalna, jest kluczowym składnikiem reagującym immunologicznie, który występuje w postaci nieaktywnej. Te nieaktywne formy składają się z domeny pro połączonej z domeną katalityczną i stają się aktywne poprzez dimeryzację indukowaną bliskością.
Aby uwidocznić aktywację kaspazy in vivo, zacznij od hodowli transfekowanych ludzkich makrofagów pochodzących z monocytów eksprymujących białka czerwonej fluorescencji i pary fluorescencyjnych białek reporterowych komplementacji. Białka reporterowe zawierają prodomenę kaspazy-1 połączoną z niefluorescencyjnymi fragmentami białka Wenus, Wenus-N lub Wenus-C.
Potraktuj komórki pożywką do obrazowania zawierającą lipopolisacharydy - stymulant stanu zapalnego pochodzenia bakteryjnego i jonofory potasu - nigerycynę.
Lipopolisacharydy oddziałują z receptorami rozpoznawania wzorców na makrofagach, inicjując tworzenie kompleksu inflamasomowego.
Cząsteczki nigericyny wnikają do komórki i wiążą się z jonami potasu, powodując ich odpływ do pożywki zewnątrzkomórkowej i zmniejszając wewnątrzkomórkowe stężenie jonów potasu. Prowadzi to do pobudzenia białek czujnikowych inflamasomu białkami adaptorowymi – białki
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych