JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:11 min. • July 8th, 2025
Aby określić ilościowo bioaktywne interferony typu I, takie jak interferon-alfa i interferon-beta, w próbce testowej, należy pobrać płytkę wielodołkową zawierającą zmodyfikowane komórki reporterowe. Komórki te wyrażają wydzielaną embrionalną fosfatazę alkaliczną, SEAP, gen reporterowy pod kontrolą promotora indukowanego interferonem-alfa i beta.
Dodać badaną próbkę zawierającą nieznane stężenie interferonu typu I. Pipetować różne stężenia interferonu typu I u ludzi do innych studzienek, które działają jak standardowe kontrole. Inkubować.
Interferon typu I w teście dobrze wiąże się ze specyficznym receptorem powierzchniowym komórki, aktywując kinazy janusowe. Te kinazy białkowe fosforylują przetworniki sygnału i aktywatory transkrypcji, STAT, białka, które dimeryzują i tworzą kompleks ze specyficznym czynnikiem regulatorowym interferonu.
Po dostaniu się do jądra kompleks wiąże się ze specyficzną sekwencją DNA w indukowanym interferonem-alfa i beta promotorze, aktywując transkrypcję genu SEAP i wytwarzając enzymy SEAP, które są wydzielane do pożywki.
Przenieść pożywki zawierające SEAP do wielodołkowych studzienek płytkowych z substratem specyficznym dla SEAP. SEAP hydrolizuje różowe
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych