Test bakteriobójczy surowicy na działanie bakteriobójcze przeciwciał za pośrednictwem dopełniacza

Weź seryjnie rozcieńczoną próbkę surowicy zawierającą przeciwciała monoklonalne przeciwko lipopolisacharydom lub LPS - składnikowi błony zewnętrznej bakterii Gram-ujemnych.

Wprowadź bakterie Gram-ujemne. Przeciwciała w surowicy wiążą się z bakteryjnym LPS.

Dodaj białka dopełniacza. Kompleks C1 wiąże się z przeciwciałami związanymi z LPS, tworząc enzymatycznie aktywny C1.

Aktywowany C1 rozszczepia C4 i C2, tworząc konwertazę C3, która z kolei rozszczepia C3, tworząc konwertazę C5. Konwertaza rozszczepia C5, aby wytworzyć C5b, który rekrutuje C6 i C7. Powstały kompleks wstawia się do błony zewnętrznej i wiąże się z C8 i wieloma C9, tworząc pory.

Uszkodzenie błony zewnętrznej destabilizuje błonę wewnętrzną, powodując lizę komórek.

Umieść mieszaninę na talerzu agarowym i rozprowadź. Inkubuj w celu wzrostu bakterii. Na płytkę nałożyć agar zawierający chlorek trifenylotetrazolu lub TTC, który ulega redukcji przez dehydrogenazy mikrobiologiczne, nadając koloniom bakteryjnym czerwony kolor.

Liczba kolonii wzrasta wraz z rozcieńczeniem próbki, co wskazuje na zmniejszoną aktywność bakteriobójczą przy niższym stężeniu przeciwciał.

Na początek należy inkubować próbki w ciepłej łaźni wodnej w t