Wykrywanie wiązania witronektyny z powierzchniami bakteryjnymi za pomocą cytometrii przepływowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:05 min. • July 8th, 2025
Weźmy probówki cytometru przepływowego zawierające dzikie i zmutowane szczepy Haemophilus influenzae, typu f.
Odpipetować bufor zawierający białka blokujące i witronektynę. Inkubować.
Białka blokujące redukują niespecyficzne interakcje na powierzchni bakterii, podczas gdy cząsteczki witronektyny wiążą się z białkiem H, białkiem wiążącym witronektynę, na powierzchniach bakterii typu dzikiego. W zmutowanym szczepie witronektyna nie wiąże się z powodu braku białka H.
wirówka. Usuń niezwiązaną witronektynę i białka blokujące.
Dodać bufor zawierający pierwszorzędowe przeciwciała anty-witronektyny, które specyficznie wiążą się z witronektyną przyczepioną do powierzchni bakterii typu dzikiego.
Następnie wprowadź przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, które wiążą się z pierwszorzędowymi przeciwciałami na witronektynie i ułatwiają wykrywanie witronektyny.
wirówka. Usuń niezwiązane przeciwciała drugorzędowe. Ponownie zawieś bakterie w buforze.
Wykonaj cytometrię przepływową, aby określić wiązanie witronektyny z powierzchnią bakterii.
Porównaj sygnały fluorescencji szczepów typu dzikiego i zmutowanego. Przesunięcie sygnału fluorescencyjnego u bakterii typu dzikiego potwierdza wiąz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych