Test oparty na fluorescencji z wykorzystaniem zmodyfikowanych limfocytów do badań przesiewowych związków immunomodulujących
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:57 min. • July 8th, 2025
Rozpocząć od kompatybilnej z fluorescencją płytki wielodołkowej zawierającej zawiesinę transgenicznych limfocytów T pochodzących od myszy.
Limfocyty te zawierają zielone białko fluorescencyjne lub kasetę ekspresyjną GFP, kontrolowane przez receptor limfocytów T lub zaangażowanie TCR ze związkami immunomodulującymi.
Każdą studzienkę należy potraktować roztworem zawierającym związki immunomodulujące o różnym potencjale.
Podczas inkubacji związki immunomodulujące oddziałują z TCR na limfocytach T.
Interakcja TCR ze związkiem stymulującym wyzwala aktywację kasety genu, zwiększając ekspresję GFP.
W przeciwieństwie do tego, interakcja TCR ze związkiem hamującym hamuje kasetę genu i zmniejsza ekspresję GFP.
Następnie nałóż komórki na barwnik fluorescencyjny kwasu nukleinowego, aby zabarwić jądra.
Odwirować płytkę, aby osadzić komórki w celu dokładnego pomiaru fluorescencji.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym żywotne limfocyty T wykazują dwa sygnały fluorescencyjne odpowiadające jądrom komórkowym i zielonym białkom fluorescencyjnym.
Zintensyfikowana zielona fluorescencja oznacza udaną stymulację limfocytów T, natomiast słaby wewnątrzkomórkowy sygnał zielonej fluorescencji potwierdza hamujące
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych