Technika fotokonwersji do badania dynamiki komórek zapalnych w poczwarkach owadów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:44 min. • July 8th, 2025
Zacznij od naczynia ze szklanym dnem zawierającego transgeniczne poczwarki Drosophila z oznakowanym uszkodzonym nabłonkiem z białkami na powierzchni komórek wykazującymi zieloną fluorescencję.
Komórki odpornościowe poczwarek - lub hemocyty - wyrażają fotokonwertowalne zielone fluorofory w cytoplazmie i czerwone białka fluorescencyjne w jądrze, ułatwiając śledzenie komórek.
Zranione komórki uwalniają chemoatraktanty – lub cząsteczki zapalne, przyciągając hemocyty do zranionego miejsca.
Mikroskopia konfokalna ujawnia zraniony obszar otoczony zielonymi komórkami nabłonka.
Podczas gojenia zielone hemocyty z czerwonymi jądrami w pobliżu rany rozciągają wypukłości błony — filopodia i blaszki i migrują w kierunku zranionego obszaru.
Z biegiem czasu, gdy chemoatraktant dyfunduje, odległe hemocyty migrują w kierunku rany, tworząc falę komórek odpornościowych.
Oświetl subpopulację migrujących hemocytów za pomocą długości fali 405 nanometrów. To nieodwracalnie przekształca fotokonwertowalny fluorofor hemocytów z zielonego na czerwony.
Te fotoprzekształcone hemocyty naprawiają zraniony nabłonek i oddalają się od miejsca rany, różnicując fotoprzekształcone hemocyty od hemocytów niefotokonwertow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych