$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Dodać pożywkę i seryjnie rozcieńczone surowice odpornościowe traktowane enzymem niszczącym receptory na monowarstwy komórek ssaków, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu wirusa.
Dodać zawiesinę wirusa grypy. Przeciwciała surowic odpornościowych, specyficzne dla białek wirusowych, wiążą się, neutralizując wirusy i zapobiegając wnikaniu do komórek.
Niskie stężenie przeciwciał neutralizujących lub przeciwciał nieneutralizujących umożliwia nieskuteczne wiązanie antygenu wirusowego, umożliwiając przyłączanie się wirusa do receptorów komórkowych.
Wyrzuć nośnik. Nałożyć media zawierające celulozę, tworząc półstałą powłokę.
Wirus wykorzystuje maszynerię komórkową gospodarza do tworzenia cząstek wirusa i wywoływania lizy komórek.
Nakładka ogranicza przemieszczanie się wirusa, ułatwiając miejscową infekcję i tworząc w monowarstwach komórek.
Usuń nakładkę. Napraw i przepuszczalność komórek.
Umyć buforem. Dodaj przeciwciała wiążące antygeny wirusowe w przepuszczalnych komórkach.
Pipeta Przeciwciała drugorzędowe sprzężone z peroksydazą chrzanową wiążące się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Wprowadź substraty peroksydazy i nadtlenek wodoru, w wyniku czego otrzymasz niebieski produkt.
Studnie obrazowe do ilościowego określania populacji komórek zakażonych wirusem w stosunku do rozcieńczeń surowicy odpornościowej.
Zidentyfikuj rozcieńczenia surowic wskazujące na określone zmniejszenie populacji zakażonych komórek w celu określenia miana neutralizacji.
Aby przeprowadzić neutralizację wirusa, przygotuj monowarstwę komórek dwa lub trzy dni wcześniej, a następnie dodaj 50 mikrolitrów VGM do każdego dołka płytki. Kolumny 11 i 12 należy stosować odpowiednio do kontroli wirusa i kontroli komórek. Dodać 50-mikrolitrowe podwielokrotności rozcieńczenia 1:20 enzymu niszczącego receptory lub surowicy poddanej działaniu RDE do pierwszego rzędu kolumn 1-10.
Wykonać dwukrotne seryjne rozcieńczenia, przenosząc 50 mikrolitrów z rzędu A do rzędu H i odrzucając 50 mikrolitrów z rzędu H. Następnie dodaj 50 mikrolitrów rozcieńczalnika do każdej studzienki kolumny kontrolnej komórki. Dodać 50 mikrolitrów wirusa do każdego dołka płytki, z wyjątkiem kolumny kontrolnej komórki. Inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez dwie do trzech godzin. Następnie usuń inokulum i dodaj nakładkę do każdej studzienki. Inkubuj płytkę przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza bez zakłóceń. Następnie napraw i poplam płytki.
Aby określić ilościowo neutralizację, umieść płytkę dołka w obszarze skanowania skanera płaskiego. Zeskanuj płytkę i uruchom oprogramowanie czytnika płytki studzienkowej, aby obliczyć wymagane miano wirusa.