JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:49 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę wielodołkową z filtrami u podstawy.
Dodaj próbkę testową zawierającą różne cytokiny.
Dodaj różne zestawy mikrosfer różniących się wielkością i intensywnością wewnętrznej fluorescencji.
Każdy zestaw jest sprzężony z przeciwciałem skierowanym przeciwko określonej cytokinie.
Inkubować płytkę w ciemności pod wpływem mieszania.
Przeciwciała wiążą się z cytokinami docelowymi, unieruchamiając je na mikrosferach.
Zastosuj próżnię, aby usunąć niezwiązane cytokiny. Cytokiny związane z mikrosferą są zatrzymywane ze względu na mniejszy rozmiar porów błony.
Dodaj koktajl przeciwciał wykrywających sprzężonych z biotyną, które wiążą się z cytokinami związanymi z mikrosferą.
Dodać fluorescencyjną streptawidynę sprzężoną reporterowo i inkubować w ciemności pod wpływem mieszania. Streptawidyna wiąże się z biotyną, unieruchamiając reporter na kompleksie mikrosfery.
Usuń niezwiązane cząsteczki i ponownie zawieś mikrosfery.
Za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikuj związane cytokiny, określając rozmiar i fluorescencję wewnętrzną mikrosfer.
Aby określić ilość określonej cytokiny, zmierz intensywność fluorescencji reportera.
Aby przeprowadzić test, przed użyciem pozwól wszystkim odczynnik
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych