Multipleksowa ilościowa detekcja bakterii przy użyciu mikrosfer magnetycznych znakowanych barwnikiem

Weź płytkę testową zawierającą mieszaninę magnetycznych mikrosfer polistyrenowych barwionych wewnętrznie różnymi spektralnie fluoroforami.

Każdy zestaw mikrosfer jest kowalencyjnie sprzężony z odrębnymi przeciwciałami wychwytującymi specyficznymi dla bakterii chorobotwórczych.

Dodaj zabitą termicznie mieszaninę bakterii chorobotwórczych. Inkubować.

Wychwytywane przeciwciała wiążą docelowe antygeny bakteryjne, tworząc kompleksy mikrosfera-bakterie.

Użyj separatora magnetycznego do osadzania kompleksów. Wyrzuć niezwiązane bakterie i umyj buforem.

Dodaj buforowe i biotynylowane przeciwciała detekcyjne, które wiążą się specyficznie z bakteriami związanymi z mikrosferą.

Magnetycznie oddzielić kompleksy i przemyć buforem.

Ponownie zawieś kompleksy w buforze. Cząsteczki reporterowe pipety zawierające streptawidynę sprzężoną z fluoroforem, które wiążą się z biotynylowanymi przeciwciałami wykrywającymi.

Magnetycznie oddziel i umyj kompleksy. Zawieś ponownie w buforze.

Podczas analizy przepływowej pierwszy laser wzbudza wewnętrzne fluorofory mikrosfery, generując unikalne sygnatury spektralne i identyfikując unikalne zestawy mikrosfer.

Drugi laser wzbudza reportery fluoroforowe związane z ba