Metoda wytwarzania pożywki kondycjonowanej oligodendrocytami

Weź szalkę Petriego pokrytą polimerem.

Dodaj linię oligodendrocytów lub komórki OL do odpowiedniej pożywki hodowlanej i inkubuj.

Dodatni ładunek na powłoce polimerowej przyciąga ujemnie naładowaną błonę komórkową, zwiększając przyczepienie komórek do naczynia. Czynniki wzrostu i składniki odżywcze w pożywce ułatwiają ekspansję komórek.

Zastąp pożywkę podłożem ubogim w składniki odżywcze i inkubuj.

Niski poziom składników odżywczych wywołuje łagodny stres w komórkach, powodując wydzielanie białek, lipidów i innych cząsteczek, w tym czynników wzrostu i cytokin, do przestrzeni zewnątrzkomórkowej.

Zebrać pożywkę do probówki.

Filtruj pożywkę, sterylizuj pożywkę, aby usunąć zanieczyszczenia komórkowe i nierozpuszczalne składniki.

Przesącz zawierający rozpuszczalne cząsteczki bioaktywne wydzielane przez komórki OL nazywany jest pożywką kondycjonowaną oligodendrocytami lub OCM.

Przechowuj OCM w niższych temperaturach do czasu dalszego użycia, aby zapobiec degradacji białek i innych cząsteczek, zachowując w ten sposób skuteczność OCM.

Płytkę z dwiema lub trzema wstępnie pokrytymi 100-milimetrowymi szalkami Petriego z 10 mililitrami zawiesiny komórek.

Inkubować w wilgotnym inkubatorze w temp