Izolowanie i hodowla komórek prekursorowych oligodendrocytów z kory mózgowej szczeniąt myszy
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:39 min. • July 8th, 2025
Weźmy korę szczeniaka myszy.
Dodaj enzym proteolityczny, który trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki. Następnie mechanicznie oddysocjuj tkankę, rozluźniając komórki.
Dodaj pożywkę glejową i DNazę, aby zdegradować wszelkie zanieczyszczające DNA.
Mechanicznie dysocjuj tkankę, aby uwolnić neurony i komórki glejowe.
Gdy niestrawiona tkanka opadnie, zbierz pożywkę zawierającą komórki i odwiruj. Usunąć supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w pożywce glejowej i umieścić je w kolbie pokrytej białkiem macierzy zewnątrzkomórkowej.
Inkubować. Astrocyty przylegają silniej do pokrytej powierzchni niż inne komórki. Pożywki glejowe sprzyjają przeżyciu tylko komórek glejowych.
Wymień nośnik, aby usunąć zanieczyszczenia.
Inkubować z wytrząsaniem w celu odłączenia leżących nad nimi komórek prekursorowych oligodendrocytów, OPC i mikrogleju.
Przenieś pożywkę z komórkami na płytkę hodowlaną.
Inkubować z wytrząsaniem, aby ułatwić różnicową adhezję mikrogleju.
Przenieść nieprzylegający supernatant OPC na płytkę wielodołkową pokrytą poli-D-lizyną. Inkubować w celu przestrzegania OPC.
Zastąp nośnik nośnikiem OPC, co pozwoli na wzrost OPC.
Dodaj 1 mililitr 0,05% trypsyny z 0,53 milimolowym EDTA do każdej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych