JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:21 min. • July 8th, 2025
Potraktuj przylegające ludzkie pluripotencjalne komórki macierzyste zmodyfikowanymi lentiwirusami w odczynniku do transfekcji.
Wirus jest nosicielem genów oporności na antybiotyki i neurogennego czynnika transkrypcyjnego, kontrolowanego przez elementy reagujące na tetracykliny i regulatorowe.
Dodatnio naładowany odczynnik do transfekcji wzmacnia fuzję wirusa i uwalnianie jego zawartości.
Wirusowe RNA ulega odwrotnej transkrypcji do DNA i integruje się z DNA komórki macierzystej, umożliwiając ekspresję elementów regulatorowych, które wytwarzają białka aktywujące.
Dodaj podłoże podstawowe z pochodną tetracykliny, która tworzy kompleks z białkami aktywującymi.
Kompleks ten wiąże się z elementem reagującym na tetracyklinę, promując ekspresję genów i wytwarzając neurogenne czynniki transkrypcyjne, które indukują różnicowanie komórek macierzystych w neuronach.
Dodaj podłoże podstawowe z antybiotykiem, aby wyeliminować nietransfekowane komórki.
Potraktuj komórki roztworem oddzielającym zawierającym enzymy proteolityczne, które degradują macierz zewnątrzkomórkową lub ECM i uwalniają komórki.
Usuń enzymy i ponownie umieść komórki w studzienkach pokrytych ECM pożywką do dojrzewania, promując
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych