Izolacja wielu typów komórek z mózgu myszy przez homogenizację mechaniczną

0 views • 3:27 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od umieszczenia elementów młynka do tkanek na lodzie. To urządzenie zawiera moździerz i dwa tłuczki o różnych średnicach.

Wlej schłodzony bufor soli do moździerza, a następnie dodaj tkankę mózgową myszy.

Bufor utrzymuje równowagę osmotyczną, zachowując strukturę i funkcję komórki.

Zmiel tkankę wieloma delikatnymi pociągnięciami za pomocą tłuczka o mniejszej średnicy, który mechanicznie ścina tkankę na mniejsze kawałki.

Następnie uderz tłuczkiem o większej średnicy, ułatwiając dalszy rozkład tkanki na komórki składowe.

Przenieś mieszaninę do probówki i odwiruj.

Usunąć supernatant.

Dodaj schłodzony bufor soli i wir, aby rozbić grudki komórek i mielinę.

Następnie dodaj pożywkę o gradiencie gęstości i odwiruj.

Ze względu na różnice w kształcie i masie komórki osiądą w dolnej warstwie, podczas gdy szczątki i mielina gromadzą się w górnej warstwie.

Odrzucić supernatant.

Dodać odpowiedni roztwór, aby uzyskać zawiesinę wielokomórkową do dalszego wykorzystania.

W celu homogenizacji tkanek dodaj 3 mililitry wstępnie schłodzonego HBSS do wstępnie schłodzonej szklanej zaprawy młynka do tkanek Dounce i przenieś połowę jednego z pobranych mózgów do moździerza. Delikatnie zmaceruj tkankę 10 pociągnięciami tłuczka A, a następnie 10 pociągnięciami tłuczka B i przenieś homogenizowaną mieszaninę do nowej 15-mililitrowej stożkowej probówki.

Napełnij probówkę do końcowej objętości 10 mililitrów wstępnie schłodzonym HBSS do odwirowania i ponownie zawieś osad w 7 mililitrach świeżego HBSS z wirowaniem przed trzymaniem próbki na lodzie. W celu usunięcia zanieczyszczeń dodać 3 mililitry wstępnie schłodzonego roztworu izotonicznego do każdej strawionej lub homogenizowanej próbki i delikatnie zagrodzić próbki, aby upewnić się, że są jednorodnie wymieszane.

Następnie odwirować próbki i ostrożnie usunąć białawy krążek zanieczyszczeń i mieliny unoszący się na powierzchni roztworu. Po wyrzuceniu zanieczyszczeń należy zebrać wszystkie oprócz ostatnich 100 mikrolitrów supernatantu z każdej probówki, nie naruszając granulek. Ponownie zawiesić każdą osadkę w 1 mililitrze roztworu FACS/BL w celu przeniesienia do pojedynczych 1,5-mililitrowych probówek wirówek

.

Po odwirowaniu z roztworem cząstek należy bardzo ostrożnie usunąć krążek zanieczyszczeń i supernatant, bez przemieszczania osadu komórkowego, aby uniknąć utraty próbki.

Po odwirowaniu ostrożnie zassać supernatant z każdej probówki i ponownie zawiesić granulki w 350 mikrolitrach świeżego FACS/BL na probówkę.

09:49

Izolacja specyficznego dla regionu mikrogleju z jednej dorosłej półkuli mózgu myszy w celu głębokiego sekwencjonowania RNA pojedynczej komórki

Related Videos

0 Views

04:53

Izolacja pierwotnego mikrogleju myszy przez sortowanie komórek aktywowanych magnetycznie w zwierzęcych modelach demielinizacji

Related Videos

0 Views

06:52

Metoda "dojenia mózgu" do izolacji nerwowych komórek macierzystych i komórek progenitorowych oligodendrocytów od żywych szczurów

Related Videos

0 Views

04:11

Izolacja komórek jednojądrzastych z mózgu myszy: technika wirowania w gradimencie gęstości do izolowania komórek jednojądrzastych rezydujących w mózgu

Related Videos

0 Views

03:48

Izolacja mikrogleju z kory mózgowej dorosłej myszy

Related Videos

0 Views

10:21

Charakterystyka i izolacja pierwotnego mikrogleju myszy za pomocą wirowania w gradifikacji gęstości

Related Videos

0 Views

10:24

Jednoczesna charakterystyka cytometryczna przepływowa wielu typów komórek pobranych z mózgu / rdzenia kręgowego myszy za pomocą różnych metod homogenizacji

Related Videos

0 Views

06:49

Wysokowydajna metoda izolowania perycytów mózgowych od myszy

Related Videos

0 Views

07:14

Połączona mechaniczna i enzymatyczna dysocjacja tkanki hipokampa mózgu myszy

Related Videos

0 Views

07:10

Kwantyfikacja globalnych modyfikacji potranslacyjnych histonów za pomocą wewnątrzjądrowej cytometrii przepływowej w izolowanym mikrogleju mózgu myszy

Related Videos

0 Views

Last updated: 27 June 2026