Izolacja wielu typów komórek z mózgu myszy przez homogenizację mechaniczną
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:27 min. • July 8th, 2025
Zacznij od umieszczenia elementów młynka do tkanek na lodzie. To urządzenie zawiera moździerz i dwa tłuczki o różnych średnicach.
Wlej schłodzony bufor soli do moździerza, a następnie dodaj tkankę mózgową myszy.
Bufor utrzymuje równowagę osmotyczną, zachowując strukturę i funkcję komórki.
Zmiel tkankę wieloma delikatnymi pociągnięciami za pomocą tłuczka o mniejszej średnicy, który mechanicznie ścina tkankę na mniejsze kawałki.
Następnie uderz tłuczkiem o większej średnicy, ułatwiając dalszy rozkład tkanki na komórki składowe.
Przenieś mieszaninę do probówki i odwiruj.
Usunąć supernatant.
Dodaj schłodzony bufor soli i wir, aby rozbić grudki komórek i mielinę.
Następnie dodaj pożywkę o gradiencie gęstości i odwiruj.
Ze względu na różnice w kształcie i masie komórki osiądą w dolnej warstwie, podczas gdy szczątki i mielina gromadzą się w górnej warstwie.
Odrzucić supernatant.
Dodać odpowiedni roztwór, aby uzyskać zawiesinę wielokomórkową do dalszego wykorzystania.
W celu homogenizacji tkanek dodaj 3 mililitry wstępnie schłodzonego HBSS do wstępnie schłodzonej szklanej zaprawy młynka do tkanek Dounce i przenieś połowę jednego z pobranych mózgów do moździerza. Delikatnie zmaceruj tkankę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych