Badanie pobudliwości neuronów fluorescencyjnych za pomocą klamry krosowej dla całych komórek

Weź unieruchomiony, transfekowany wycinek koronalny myszy w komorze nagraniowej perfuzji płynu mózgowo-rdzeniowego.

Wycinek zawiera rzadką populację neuronów piramidowych wyrażających docelowy enzym i białko fluorescencyjne.

Zmontuj pipetę rejestrującą składającą się z roztworu wewnątrzkomórkowego i elektrody podłączonej do wzmacniacza do pomiaru sygnałów neuronalnych.

Mikroskopowo zidentyfikuj obszar tkanki docelowej i zlokalizuj neuron fluorescencyjny.

Zastosuj dodatnie ciśnienie do pipety, aby zapobiec zatkaniu i przesunąć ją do docelowego neuronu.

Dodatnie ciśnienie powoduje niewielkie wgłębienie na błonie neuronalnej w kontakcie.

Zwolnij ciśnienie, tworząc szczelne uszczelnienie między membraną a końcówką.

Ustaw potencjał utrzymywania na stałą wartość ujemną, aby ustabilizować neuron.

Zastosuj krótkie podciśnienie, aby rozerwać membranę, łącząc cytoplazmę z wnętrzem pipety i ustanawiając konfigurację całej komórki.

Przełącz się w tryb cęgów prądowych i zastosuj dodatnie impulsy prądowe, generując potencjały czynnościowe wskazujące na pobudliwość neuronów.

Przenieś plasterek do komory rejestracyjnej za pomocą pipety Pasteura lub małego pędzelka. Przytrzymaj plasterek harfą i pr