Pomiar aktywności neuronalnej w wycinku mózgu myszy po długotrwałej inkubacji

Zabezpiecz wycinek mózgu myszy w komorze nagraniowej, wypełniony natlenionym aCSF po długotrwałej inkubacji.

Komórki w plasterku są załadowane wskaźnikiem wapnia, ułatwiającym wewnątrzkomórkowe pomiary wapnia.

Weź pipetę rejestracyjną składającą się z elektrody w roztworze elektrolitu.

Zidentyfikuj neuron docelowy. Umieść pipetę rejestrującą z dodatnim ciśnieniem na błonie komórkowej, tworząc wgłębienie.

Zastosuj podciśnienie, aby uzyskać szczelne uszczelnienie.

Ponadto zastosuj impulsy podciśnienia, rozrywając membranę i ustanawiając konfigurację całej komórki.

Perfuzja płynu mózgowo-rdzeniowego o wysokim stężeniu potasu, który depolaryzuje błonę neuronu.

Depolaryzacja otwiera kanały sodowe, wyzwalając potencjał czynnościowy, który z kolei aktywuje kanały wapniowe bramkowane napięciem i umożliwia napływ wapnia.

Jony wapnia wiążą się ze wskaźnikiem, wzmacniając fluorescencję, którą można uwidocznić przy odpowiednim oświetleniu.

Wzrost fluorescencji wewnątrzkomórkowej, spowodowany napływem wapnia po zastosowaniu potasu, wskazuje na żywotność neuronów po długotrwałej inkubacji.

W celu nagrania umieść tkankę w zanurzonej komorze zapisowej pod mikroskopem i perfuzuj ją natlenowanym aCS