JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:07 min. • July 8th, 2025
Zacznij od przylegających kultur wczesnych embrionalnych neuronów piskląt na zewnątrzkomórkowych matrycach wieloelektrodowych pokrytych macierzą (MEA).
Podstawa MEA zawiera siatki maleńkich elektrod, które rejestrują aktywność neuronalną.
W kulturze testowej neurony rosną w obecności toksyny, podczas gdy w kulturze kontrolnej neurony rosną bez toksyny.
Przed nagraniem zastąp pożywki w obu MEA pożywkami wolnymi od toksyn i krótko inkubuj.
Następnie umieść jeden MEA w urządzeniu nagrywającym i rozpocznij nagrywanie.
Neurony komunikują się za pomocą impulsów elektrycznych zwanych potencjałami czynnościowymi lub kolcami.
W synapsie te potencjały czynnościowe wyzwalają uwalnianie neuroprzekaźnika, propagując sygnał do następnego neuronu.
Elektrody MEA rejestrują skoki generowane przez neurony połączone synaptycznie.
W warunkach kontrolnych zdrowa, dojrzała sieć neuronalna wykazuje synchroniczną aktywność impulsową.
W badanej kulturze zmniejszone wygłuszanie i synchronizacja sugerują upośledzone dojrzewanie sieci neuronalnej spowodowane przez toksynę.
W dniu pobrania należy zastąpić pożywkę hodowlaną świeżą pożywką neurobazalną i umieścić matryce z powrotem w inkubatorze CO2 na co najmniej dwie godziny przed rejestracją. Uruchom oprogramowanie do nagrywania i ustaw temperaturę matrycy wieloelektrodowej na 37 stopni Celsjusza, klikając ikonę temperatury. Ustaw parametry akwizycji, wybierając strumienie w lewym panelu okna i klikając prawym przyciskiem myszy ikonę muzy. Następnie wybierz Dodaj Processing and Spike Detector i kliknij OK w wyskakującym okienku. Spike Detector 6 firmy STD pojawi się pod nazwą pliku.
Następnie kliknij prawym przyciskiem myszy Spike Detector, wybierz Dodaj Processing and Burst Detector, a następnie kliknij OK w wyskakującym okienku. Burst Detector ISI pojawi się pod ikoną muzy. Następnie kliknij prawym przyciskiem myszy Burst Detector, wybierz Dodaj kompilator przetwarzania i statystyk neuronowych. W oknie podręcznym upewnij się, że wybrano opcję Nagłówek pliku, Zagregowane statystyki studni i Synchronizacja. Kliknij przycisk OK.
Kompilator statystyk pojawi się poniżej. Kliknij ikonę zegara u dołu ekranu i zmień informacje w sekcji Ustawienia, aby nagrywać co 5.1 minuty i nagrywać przez pięć minut. Zostanie to uruchomione natychmiast i zostanie wykonane raz. Po wyjęciu matrycy wieloelektrodowej z inkubatora należy umieścić ją na jednostce rejestrującej i zablokować na miejscu. Rozpocznij rejestrowanie aktywności sieciowej, klikając Rozpocznij nagrywanie w sekcji zaplanowanego nagrywania.