Modelowanie uszkodzenia neuronów w pierwotnych neuronach ziarnistych móżdżku myszy

Zacznij od hodowli pierwotnych neuronów ziarnistych móżdżku myszy.

Dodaj wysokie stężenia N-metylo-D-asparaginianu lub NMDA, agonisty receptora neuroprzekaźnika pobudzającego i glicyny, koagonisty. Inkubuj kulturę.

NMDA i glicyna wiążą się ze swoimi odpowiednimi miejscami na receptorach NMDA, co prowadzi do nadmiernej stymulacji i powoduje masowy napływ jonów wapnia.

Zwiększony wewnątrzkomórkowy wapń aktywuje fosfolipazy zależne od wapnia, które degradują fosfolipidy błony komórkowej, powodując uszkodzenie błony.

Dodatkowo wewnątrzkomórkowy wapń aktywuje proteazy, które degradują białka komórkowe.

Podwyższony poziom wapnia indukuje również stres i fragmentację mitochondriów, co prowadzi do uwalniania reaktywnych form tlenu lub ROM i powoduje stres oksydacyjny.

Ponadto wewnątrzkomórkowy wapń aktywuje DNazy, które wraz z ROM powodują uszkodzenie DNA, ostatecznie prowadząc do śmierci neuronów.

Zastąp pożywkę świeżą pożywką bez NMDA i glicyny, aby zatrzymać kaskadę sygnalizacyjną.

Model uszkodzeń neuronalnych wywołanych przez NMDA jest gotowy do dalszej analizy.

Aby wywołać ekscytotoksyczność neuronalną NMDA, po siedmiu dniach in vitro, należy leczyć neurony ziarniste móżdżku 100 mikromolowymi NMDA i 10 mikromolowymi glicynami przez jedną godzinę. Następnie zastąp pożywkę kondycjonowaną pożywką z równoległych kultur bez obróbki. Stężenie to powoduje 50% śmierć komórek w ciągu 24 godzin po zabiegu.