JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:09 min. • July 8th, 2025
Weź utrwalone i przepuszczalne neurony w probówce.
Dodaj bufor blokujący, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych.
Odwirować zawiesinę i usunąć supernatant. Następnie ponownie zawieś neurony w buforze.
Przenieść zawiesinę równomiernie do probówek zawierających nieoznakowane i znakowane fluoroforem przeciwciała pierwszorzędowe.
Inkubacja, pozwalająca przeciwciałom specyficznie wiązać się z mitochondrialnymi łańcuchami oddechowymi lub podjednostkami kompleksu MRC, białkiem związanym z mitochondrialnym DNA i mitochondrialnym białkiem błony zewnętrznej w neuronach.
Usunąć wszelkie niezwiązane przeciwciała.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi fluoroforem, które wiążą się z nieoznakowanymi przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Odwirować mieszaninę i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić neurony w buforze i przenieść je do probówek mikrowirówek.
Wykonaj cytometrię przepływową, aby wykryć sygnały fluorescencyjne na znakowanych neuronach, odpowiadające poziomom ekspresji podjednostek kompleksu MRC i pomiarowi względnych poziomów mitochondrialnego DNA.
Zablokować próbki w 1 mililitrze buforu blokującego i przemyć komórki przez odwirowanie PBS, jak pokazano. Aby wyk
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych