JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:42 min. • July 8th, 2025
Umieść mitochondria wyizolowane z komórek nerwiaka zarodkowego w buforze zawierającym nieprzepuszczalny dla błony, wiążący wapń barwnik fluorescencyjny.
Inkubuj, aby mitochondria ustabilizowały się w buforze.
Dodać bufor zawierający wapń i inkubować z potrząsaniem.
Jony wapnia wiążą się z cząsteczkami barwnika, powodując ich fluorescencję.
Za pomocą spektrometru fluorescencyjnego monitoruj fluorescencję barwnika w czasie rzeczywistym.
Teraz należy wstrzykiwać bufor zawierający wapń w regularnych odstępach czasu.
Zwiększone stężenie wapnia sprzyja mitochondrialnemu wychwytowi wapnia, zmniejszając wolne jony wapnia dostępne do wiązania się z barwnikiem, co skutkuje zmniejszoną fluorescencją.
Gdy mitochondria osiągną maksymalną zdolność magazynowania wapnia, dalsze dodawanie wapnia powoduje otwarcie porów przejściowych przepuszczalności mitochondriów (mPTP).
Ten otwór porów uwalnia wapń z mitochondriów do bufora, gdzie wiąże się z barwnikiem i powoduje zwiększoną fluorescencję.
Określ całkowitą ilość wapnia potrzebną do indukowania otwarcia mPTP, co odzwierciedla zdolność zatrzymywania wapnia w mitochondriach.
Przygotować pożywkę z chlorkiem potasu i dodać zielony barwnik fluorescency
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych