Transmisyjne obrazowanie mikroskopowe elektronów endocytozy pęcherzyków synaptycznych w neuronach hipokampa myszy

Zacznij od potraktowania mysich neuronów hipokampa buforem o wysokiej zawartości potasu zawierającym peroksydazę chrzanową lub HRP.

Wysoki poziom potasu depolaryzuje neurony presynaptyczne, wywołując egzocytozę pęcherzyków synaptycznych. Neurony następnie odzyskują błony pęcherzyków synaptycznych poprzez endocytozę, poprzez włączenie HRP do nowo powstałych pęcherzyków. Napraw neurony aldehydem glutarowym i umyj, aby usunąć nadmiar aldehydu glutarowego.

Dodaj nadtlenek wodoru i podłoże chromogenne, które jest utleniane przez HRP, tworząc osady o gęstości elektronów. Umyć, aby usunąć wszelkie nieprzereagowane podłoże.

Potraktuj tetratlenkiem osmu, aby zwiększyć kontrast membrany, a następnie zmyj nadmiar odczynnika. Następnie dodaj octan uranylu, aby zwiększyć kontrast organelli.

Odwodnić neurony za pomocą zwiększenia stężenia etanolu i zanurzyć je w żywicy.

Mikroskopijnie identyfikuj obszary o dużej gęstości komórek i wycinaj je. Następnie przygotuj ultracienkie sekcje.

Przenieś fragment na miedzianą siatkę i zabarwij go środkami kontrastowymi.

Korzystając z transmisyjnej mikroskopii elektronowej, pęcherzyki zawierające HRP wyglądają jak struktury o dużej gęstości elektronów.

Stymuluj kult