JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:09 min. • April 28th, 2025
Umieść wycinek hipokampa z mózgu myszy w studzience zawierającej bufor. Wycinek zawiera sieć neuronów, które komunikują się za pośrednictwem synaps.
Presynaptyczne zakończenia neuronów zawierają pęcherzyki wypełnione neuroprzekaźnikami z charakterystycznymi transbłonowymi transporterami, podczas gdy zakończenia postsynaptyczne zawierają charakterystyczne białka rusztowania, które regulują receptory neuroprzekaźników. Oba służą jako kluczowe markery struktur synaptycznych.
Zastąp bufor roztworem blokującym przepuszczalność i inkubuj z mieszaniem, aby przeniknąć błony komórkowe i zablokować niespecyficzne miejsca wiązania.
Dodaj pierwszorzędowe przeciwciała skierowane do markerów presynaptycznych i postsynaptycznych i inkubuj z mieszaniem, aby umożliwić wiązanie.
Umyj plasterek, dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem specyficzne dla przeciwciał pierwszorzędowych i inkubuj z mieszaniem w ciemności.
Umyj plasterek, a następnie umieść go na zjeżdżalni.
Używając mikroskopu konfokalnego, zidentyfikuj obszar zainteresowania i powiększ, aby uwidocznić synapsy.
Uchwyć obrazy, aby zidentyfikować fluorescencyjnie znakowane markery presynaptyczne i postsynaptyczne oraz ocenić ich kol
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych