Name: Tytuł: Hermetyzacja komórek za pomocą kropelek (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:09:54.000+00:00
Duration: 13 min 10 s
Description: Poznaj metodę hermetyzacji komórek w kroplach do druku 3D w biologii komórkowej. Technika ta wykorzystuje zawór elektromagnetyczny do precyzyjnego wyrzutu komórek w żelu i mediach.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Przygotowanie komórek NIH3T3:
A. Komórki do wyrzutu
<ol>
<li>Poddać komórki trypsynizacji, następnie rozcieńczyć w stosunku 1:1 pożywką dla komórek i przenieść z kolby T75 do probówki Falcon 15 mL</li>
<li>Odwirować komórki do postaci granulatu, odprowadzić supernatant i przemyć komórki za pomocą DPBS</li>
<li>Ponownie odwirować komórki do postaci granulatu i odprowadzić supernatant</li>
<li>Resuspendować komórki w pożywce</li>
<li>Wyznaczyć gęstość komórek za pomocą komory licznikowej Hemocytometr (~200 X 104 cells/mL na kolbę T75)</li>
<li>Odwirować zawiesinę komórkową, odprowadzić supernatant i resuspendować w odpowiedniej ilości pożywki w celu uzyskania różnych stężeń komórek</li>
</ol>
B. Wyrzut komórek
<ol>
<li>Wymieszaj komórki za pomocą wortexa przed ich wyrzutem</li>
<li>Przenieś 200 µL zawiesiny komórkowej do strzykawki</li>
<li>Ustaw odpowiedni tryb w generatorze impulsów<ol>
<li>W celu wyrzutu pojedynczych kropel oraz wielu kropel (salw), ustaw generator impulsów w trybie „E. BUR”</li>
<li>W celu ciągłego wyrzutu kropel, ustaw generator impulsów w trybie „NORM”</li>
</ol></li>
<li>Zmień ustawienia sygnału<ol>
<li>Ustaw wysoki i niski poziom napięcia wyjściowego: HIL na 5 V oraz LOL na 0 V i upewnij się, że dioda „LIM” świeci się</li>
<li>Ustaw sygnał jako impuls prostokątny</li>
<li>Zmień czas otwarcia elektrozaworu podczas wyrzutu kropli, zmieniając wartość „WID” lub cykl pracy („DUTY”)</li>
<li>Zmień częstotliwość wyrzutu, zmieniając wartość „PER”</li>
<li>Zmień liczbę kropel wyrzucanych w jednej salwie, zmieniając wartość „BUR”</li>
</ol></li>
<li>Wyrzuć zawiesinę komórkową na przygotowane podłoże w celu obrazowania pod mikroskopem</li>
</ol>
C. Barwienie
<ol>
<li>Przygotować roztwór barwnika zawierający 0,5 µL calcein-AM i 2 µL etydyny homodimeru na 1 mL DPBS</li>
<li>Zanurzyć przygotowany substrat w roztworze barwnika</li>
<li>Inkubować próbkę przez 10 minut w temperaturze 37°C przed obrazowaniem</li>
</ol>
Walidacja eksperymentu
<ol>
<li>Przy użyciu fluorescencyjnego mikroskopu Nikon Eclipse TE-2000 U<ol>
<li>Oprogramowanie Spot advanced (Diagnostics, Inc.)</li>
<li>Test Live/Dead</li>
</ol></li>
</ol>

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop fluorescencyjny</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE-2000 U</td><td></td></tr><tr><td>Elektromagnetyczny zawór wyrzucający komórki</td><td></td><td></td><td></td><td>Częstotliwość pracy: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. Sterownik zaworu 12V: prąd sterujący 2.5 Amp</td></tr><tr><td>Przenośny zbiornik powietrza 5 galonów</td><td></td><td>Coleman</td><td>Powermate CT5</td><td>Powietrze pod ciśnieniem: 30 PSI </td></tr><tr><td>Regulatory ciśnienia</td><td></td><td>Marsh Bellofram</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Generator impulsów</td><td></td><td></td><td>HP8112A</td><td>Generowanie częstotliwości sterującej: 50 MHz</td></tr><tr><td>Stół XYZ</td><td></td><td>Newmark Systems</td><td></td><td>Z silnikiem krokowym: stół xy o zakresie ruchu 6 cali (NLS4-6-25), stół z o zakresie ruchu 2,5 cala (NLS4-2.5-25), kontroler 3-osiowy (NSC-G3), rozdzielczość 0.1um</td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>Linia komórkowa</td><td></td><td></td><td>fibroblasty</td></tr><tr><td>Trypsyna</td><td></td><td></td><td></td><td>roztwór 0.05%</td></tr><tr><td>Pożywka dla komórek NIH 3T3</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Bufor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75</td><td></td><td></td><td></td><td>Kolby do hodowli tkankowej</td></tr><tr><td>Plastikowe probówki stożkowe</td><td></td><td></td><td></td><td>15 ml, do hodowli tkankowej</td></tr></tbody></table>

tytuł: enkapsulacja komórek w kropelkach

Title Cell Encapsulation by Droplets

Tytuł: Enkapsulacja komórek w kropelkach

Nazywam się Hang Moon. Współpracuję z profesorem specjalizującym się w badaniach nad kondomami. Razem pracujemy z platformą XYJ, aby stworzyć strukturę 3D komórki.Witajcie, jestem PE oraz Lynn i pracuję nad projektem drukowania komórek z wykorzystaniem enkapsulacji komórek, mediów i żeli. Jest to zawór elektromagnetyczny służący do wyrzutu mieszaniny komórek i hydrożeli do medium hodowlanego. Zawór elektromagnetyczny jest aktywowany za pomocą dwóch linii sygnałowych.Linia sygnałowa pochodzi stąd, z płytki stykowej. Sygnał pochodzi z tego miejsca. Ta linia, przechodząca przez tę linię, to pierwszy generator funkcji.Najpierw jest on generowany w sposób zaprogramowany. Jeśli zatem chcą Państwo zmienić impuls, można zmodyfikować program w linii przełączników lub sterować generatorem procesu za pomocą komputera. Zawór komórkowy jest otwierany i zamykany za pomocą sygnału elektrycznego, natomiast dopływ do komórki odbywa się poprzez tę linię.Komórki oraz pożywka lub żel agro są podawane za pomocą strzykawek. Strzykawki znajdują się w wodzie, a tłok wewnątrz strzykawki jest dociskany przez powietrze. Sprężone powietrze jest dostarczane ze zbiornika, zgodnie z przebiegiem linii.Zatem cienk

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Tytuł Kapsułkowanie komórek przez kropelki

Prezentujemy protokoły trójwymiarowej (3D) enkapsulacji komórek w syntetycznych hydrożelach. Procedura enkapsulacji została opisana dla dwóch powszechnie stosowanych metod sieciowania (addycji typu Michaela oraz mechanizmów wolnorodnikowych inicjowanych światłem), a także dla szeregu technik oceny zachowania enkapsulowanych komórek.

Enkapsulacja komórkowa w trójwymiarowych hydrożelach w inżynierii tkankowej

Łącząc generowanie monodyspersyjnych kropli z inercyjnym porządkowaniem komórek i cząsteczek, opisujemy metodę enkapsulacji pożądanej liczby komórek lub cząsteczek w pojedynczej kropli z częstotliwością rzędu kHz. Wykazujemy wydajność dwukrotnie przekraczającą wydajność enkapsulacji nieuporządkowanej w przypadku kropli z jedną lub dwiema cząsteczkami.

Wysokoprzepustowa mikroenkapsulacja pojedynczych komórek i wielu komórek

Ten film demonstruje technikę immunologicznego barwienia komórek zamkniętych w hydrożelu 3D. Kultura hydrożelowa zawierająca nerwowe komórki progenitorowe jest utrwalana, przepuszczalna i traktowana roztworem blokującym, aby zapobiec nieswoistemu barwieniu immunologicznemu. Dodaje się koktajl przeciwciał pierwszorzędowych w celu związania określonych białek, a następnie znakowane fluorescencyjnie przeciwciała drugorzędowe i barwienie jądrowe. Próbka jest następnie umieszczana na szkiełku...

Barwienie immunologiczne komórek zamkniętych w układzie hydrożelowym 3D

Ten film i rękopis opisują metodę opartą na emulsji do kapsułkowania komórek ssaków w kulkach alginianowych od 0,5% do 10%, które mogą być produkowane w dużych partiach za pomocą prostego mieszanego naczynia. Zamknięte w kapsułkach komórki mogą być hodowane in vitro lub przeszczepiane do zastosowań w terapii komórkowej.

Enkapsulacja komórek ssaków w kulkach alginianowych za pomocą prostego naczynia z mieszadłem

Ten artykuł przedstawia protokół do zasiewania rzadkiej populacji komórek za pomocą końcówek pipet do kropelkowych urządzeń mikroprzepływowych w celu zapewnienia wyższej efektywności enkapsulacji komórek w kropelkach.

Metoda oparta na końcówkach pipet do wysiewu komórek do kropelkowych platform mikroprzepływowych

Prezentowany tutaj jest protokół użycia alginianu jako polimeru w mikrokapsułkowaniu unieśmiertelnionych komórek w celu długoterminowego dostarczania leków biologicznych do oczu gryzoni.

Technologia komórek kapsułkowanych do dostarczania leków biologicznych do oka myszy

Testy kropelek wody w oleju są przydatne do chemii analitycznej, ewolucji enzymów i analizy pojedynczych komórek, ale zazwyczaj wymagają mikrofluidyki do formowania kropel. W tym miejscu opisujemy emulgację z szablonami cząstek, bezprzepływowe podejście do wykonywania testów kropelkowych.

Emulgacja szablonowa cząstek umożliwia oznaczanie kropel bez mikroprzepływowości

Ten artykuł opisuje enkapsulację ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC) za pomocą urządzenia do ogniskowania przepływu współosiowego. Wykazaliśmy, że ta technologia enkapsulacji mikroprzepływowej umożliwia efektywne tworzenie sferoid hPSC.

Mikroprzepływowe wytwarzanie mikrokapsułek typu core-shell zawierających sferoidy ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych

Ten artykuł przedstawia prostą metodę szybkiego wytwarzania gigantycznych pęcherzyków jednowarstwowych z zamkniętymi białkami cytoszkieletu. Metoda ta okazuje się przydatna do oddolnego odtwarzania struktur cytoszkieletu w zamknięciu i interakcjach cytoszkielet-błona.

Szybka enkapsulacja odtworzonego cytoszkieletu w gigantycznych pęcherzykach jednowarstwowych

Ten artykuł przedstawia protokół produkcji nowego typu substratu hodowlanego z setkami mikropojemników namm2, w których organoidy mogą być hodowane i obserwowane za pomocą mikroskopii o wysokiej rozdzielczości. Szczegółowo opisano również protokoły wysiewu komórek i barwienia immunologicznego.

Wysokoprzepustowa platforma do hodowli i obrazowania 3D organoidów

Ten przewodnik dla początkujących przedstawia ogólny protokół przygotowania gigantycznych pęcherzyków jednowarstwowych (GUV) metodą przenoszenia kropel, omawiając krytyczne etapy i dostarczając informacji, które pomogą w możliwych korektach wymaganych dla różnych zastosowań, w tym biologii syntetycznej i mikrorobotyki.

Wykorzystanie metody przenoszenia kropelek w celu niezawodnego przygotowania gigantycznych pęcherzyków jednowarstwowych

Poznaj metodę hermetyzacji komórek w kroplach do druku 3D w biologii komórkowej. Technika ta wykorzystuje zawór elektromagnetyczny do precyzyjnego wyrzutu komórek w żelu i mediach.

Tytuł: Enkapsulacja komórek w kropelkach

Przeglądaj więcej filmów