Jaka jest znaczność stosowania transgennych zarodków myszy?

Transgeniczne zarodki myszy umożliwiają ekspresję określonych genów, ułatwiając badanie funkcji genów podczas różnicowania neuronów.

Jak luciferyna przyczynia się do procesu obrazowania?

Luciferyna współdziała z enzymami luciferase, aby wytwarzać bioluminescencję, którą można zmierzyć w celu oceny poziomów ekspresji genów.

Jakie techniki obrazowania są wykorzystane w tym badaniu?

Badanie wykorzystuje obrazowanie fluorescencyjne, obrazowanie bioluminescencyjne i obrazowanie świetlne w celu zebrania kompleksowych danych na temat ekspresji genów.

Jakie są zalety obrazowania time-lapse?

Obrazowanie time-lapse pozwala badaczom obserwować dynamiczne zmiany w ekspresji genów w czasie, dostarczając wglądu w proces różnicowania.

Czy tę metodologię można zastosować do innych typów komórek?

Tak, metodologię tę można potencjalnie dostosować do badania ekspresji genów w różnych typach komórek poza neuronami.

Monitorowanie ekspresji genów w czasie rzeczywistym w wycinkach mózgu za pomocą obrazowania trójwymiarowego

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:00 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od naczynia zawierającego korowe wycinki mózgu z transgenicznych zarodków myszy w pożywce uzupełnionej lucyferyną.

Obszar korowy zawiera nerwowe komórki macierzyste, które wyrażają białka zielonej fluorescencji lub GFP, oraz gen będący przedmiotem zainteresowania połączony z genem reporterowym lucyferazy.

Umieść naczynie na stoliku mikroskopu w celu pomiarów fluorescencji i luminancji.

Uchwyć obrazy testowe fluorescencji GFP, koncentrując się na obszarach zainteresowania.

Podczas różnicowania neuronów komórki macierzyste zaczynają wyrażać interesujący je gen i wytwarzać białka połączone z enzymem lucyferazy.

Lucyferyna oddziałuje z enzymami lucyferazy, generując bioluminescencję, która bezpośrednio odzwierciedla ekspresję interesującego genu podczas różnicowania.

Uchwyć obraz fluorescencyjny, aby zidentyfikować określone regiony aktywności, obraz bioluminescencyjny do monitorowania dynamicznej ekspresji genów oraz obraz jasnego pola w celu uzyskania informacji morfologicznych.

Zdobądź te trójwymiarowe obrazy poklatkowe, aby zobrazować ekspresję genów podczas różnicowania neuronów w natywnym środowisku tkankowym.

Aby zobrazować ekspresję reportera lucyferazy w kulturach plasterków, wybierz cel 40x. I umieść naczynie na próbkę na stoliku mikroskopu. Uzyskaj obraz testowy fluorescencji. I ustaw pozycję i płaszczyznę ostrości na obszar zainteresowania pod oświetleniem odpowiedniego światła wzbudzenia. Następnie uruchom akwizycję poklatkową za pomocą trójwymiarowej luminescencji, fluorescencji i akwizycji jasnego pola przez 24 godziny.