Badania kliniczne i usunięcie rdzenia kręgowego w mysim modelu stwardnienia zanikowego bocznego (ALS)

Mysi model stwardnienia zanikowego bocznego (ALS) jest badany klinicznie i behawioralnie. Jako warunek wstępny towarzyszącej analizy immunohistologicznej szczegółowo przedstawiono przygotowanie rdzenia kręgowego.

Cześć, nazywam się Lar Turner. Odbywam staż podoktorski na Wydziale Neurologii Uniwersytetu w Ingham w Niemczech. Cześć, nazywam się Lin Gunda.

Jestem studentem medycyny i piszę pracę dyplomową w tym laboratorium. Dzisiaj pokażemy Państwu testy kliniczne SODG 93, modelu mchu zanikowego stwardnienia bocznego. Ponadto zademonstrujemy test funkcji silnika za pomocą tak zwanego testu wirnika i dodatkowo innego testu funkcji silnika z wiszącym uchwytem drucianym w celu przeprowadzenia analizy immunologicznej.

Po testach funkcjonalnych myszy as, niezbędna procedura polega na usunięciu rdzenia kręgowego, nerwu STIC i mięśnia żołądkowego. Chcemy szczegółowo pokazać te zabiegi chirurgiczne, a na koniec przedstawić kilka przykładowych wyników immunologii. No dobrze, ale zacznijmy najpierw od testów klinicznych.

Jest to swobodnie poruszający się dziki typ MOE, który nie wykazuje żadnych objawów klinicznych, takich jak drżenie mięśni lub parsa w naszym systemie klasyfikacji klinicznej. To byłby wynik czwarty. Jest to transgeniczny A LS moe.

We wczesnym stadium choroby wykazuje silne drżenie prawej kończyny brzusznej, które klasyfikuje go jako WYNIK trzy E. Poważne nieprawidłowości chodu Klasyfikują to zwierzę jako wynik drugi. Przeciąganie co najmniej jednej kończyny tylnej jest klasyfikowane jako wynik kliniczny pierwszy w teście wiszącego drutu, oceniana jest surowa siła mięśni żeber. Każda mysz jest umieszczona na drucie CustomMade i ostrożnie odwrócona do góry nogami nad przyciskiem pokrytym słomą.

Po treningu przez trzy kolejne razy trwające co najmniej 180 sekund mierzone jest opóźnienie do upadków. Każda mysz ma do trzech prób przytrzymania odwróconej pokrywy przez maksymalnie 180 sekund, przy czym najdłuższy okres jest rejestrowany w porównaniu do myszy z białym przewodem po prawej stronie. Płytka transgeniczna myszy po lewej stronie jest bardzo słaba i spada z pokrywy przed osiągnięciem maksimum.

Aparat prętowy wirnika służy do pomiaru koordynacji ruchowej, równowagi i zdolności uczenia się motorycznego. Dobry występ wymaga wysokiego poziomu koordynacji sensoryczno-ruchowej. Składa się ze sterowanego komputerowo, napędzanego silnikiem wrzeciona obrotowego i pięciu pasów ruchu na pięć m.

Usterki myszy są wykrywane automatycznie przez nacisk na dolną plastikową płytkę. Po treningu przez trzy kolejne razy trwające co najmniej 180 sekund ze stałą prędkością 15 rund na minutę, mierzy się czas, przez jaki zwierzę może pozostać na obracającej się zgniliźnie. Każde zwierzę przechodzi trzy próby i odnotowuje się najdłuższe opóźnienie bez upadku.

Zdrowy mos typu dzikiego po lewej stronie biega bez trudu na pręcie wirnika. Natomiast transgeniczny a s mo po prawej stronie ma poważne problemy z utrzymaniem się nawet na pręcie wirnika i zsuwa się po chwili obserwowany od tyłu. Widzisz poważne trudności z uruchomieniem lewej myszy retre.

W porównaniu ze zdrową myszą z gwintownikiem drucianym nie jest w stanie nadążyć za prędkością pręta wirnika i nie może pchać się w górę za pomocą kończyn HIN. W celu przeprowadzenia analizy immunochemicznej rdzenia kręgowego zwierzęta muszą zostać złożone w ofierze. Bardzo ważne jest, aby zawsze ściśle przestrzegać lokalnych wytycznych dotyczących prawidłowego przeprowadzania eksperymentów na zwierzętach.

W tym kontekście, W tym Bardzo uproszczony przegląd kręgosłupa i otaczających go tkanek przedstawiono główne struktury anatomiczne. Umieścimy zwierzę na jego brzusznej stronie i zaczniemy przygotowywać mięśnie z worka grzbietowego. Po usunięciu tkanki mięśniowej uzyskamy dostęp do kręgosłupa, który otacza rdzeń kręgowy.

Po uśmierceniu zwierzęcia i perfuzji roztworem zawierającym paraformę, rdzeń kręgowy może zostać usunięty. Zwierzę umieszcza się na stole operacyjnym, a pełne kończyny mocuje się po bokach i porządkuje odsłonięcie tylnej części myszy. Zwierzę jest zwilżane w celu spłaszczenia sierści i ułatwienia następnego nacięcia skóry.

W tym celu używa się ostrego skalpela. Uważaj, aby rozciągnąć skórę na obie strony. Aby ułatwić przecięcie mięśnia nogi, należy go przygotować.

Ich skóra również musi zostać nacięta. Po zakończeniu nacięcia skóry jest ona delikatnie odciągana na bok. Za pomocą pęsety usuwamy mięśnie nóg i nerw kulszowy, nadal zbliżamy się do rdzenia kręgowego i umieszczamy zwierzę na nowym stole operacyjnym

Teraz łatwo jest zidentyfikować czaszkę, szyję, mięśnie i kręgosłup. Po zidentyfikowaniu wszystkich tych struktur łatwo jest przejść do następnego kroku. Mięśnie szyi i więzadło nu muszą zostać usunięte.

Uważaj, aby nie naciąć zbyt głęboko i nie poprowadzić kręgosłupa. W następnym kroku mięśnie przykręgosłupowe są całkowicie usuwane, aby odsłonić kręgosłup. Aby uzyskać dostęp do kręgosłupa, należy wykonać kilka ektomii.

Zaczynamy od części szyjnej kręgosłupa, w tym stawu potylicznego atlantyckiego. Aby wykonać laminektomię, musimy przeciąć łuk kręgowy, aby móc usunąć wszystkie wyrostki kręgowe z trzonu kręgu. Jak wyjaśniono wcześniej, laminektomia rozpoczyna się od przecięcia łuków kręgowych.

Następnie lainę można odciągnąć. Ponownie należy uważać, aby nie uszkodzić rdzenia kręgowego, ponieważ wiele innych ral musi zostać usuniętych. Pomocne jest używanie nożyczek kątowych i nacinanie kilku łuków kręgowych po obu stronach jednocześnie.

Następnie pociągnij za wyrostki grzbietowe, aby całkowicie usunąć laminę kręgową i zbliżenie. Widzisz, że nożyczki muszą być ostrożnie włożone najbardziej bocznie z boku kanału kręgowego. Pozostałe boczne części kręgosłupa muszą zostać usunięte, aby ułatwić późniejsze całkowite usunięcie rdzenia kręgowego.

Anatomicznym punktem orientacyjnym rdzenia kręgowego są tak zwana esencia szyjna i lędźwiowa. Po zakończeniu ektomii całego rdzenia kręgowego upewnij się, że przetransektowałeś również wszystkie brzuszne korzenie rdzenia kręgowego i uwolnij go z materii opon mózgowych. Następnie przecina się rdzeń kręgowy w odcinku szyjnym.

Czaszkowo i jego usuwanie rozpoczyna się ponownie. Dotykaj rdzenia kręgowego bardzo ostrożnie, aby nie uszkodzić tej tkanki, ponieważ może to spowodować poważne ograniczenia dla późniejszej analizy immunoimmunochemicznej. Usunięcie rdzenia kręgowego jest dalej kontynuowane na poziomie klatki piersiowej i przechodzi do części lędźwiowej.

Na koniec jest ponownie przecięty, tym razem z boku sznura konia. Teraz jesteśmy w stanie całkowicie go uwolnić. Tutaj widzisz rdzeń kręgowy umieszczony tuż obok jego pierwotnego położenia w kolumnie RAL.

Ostatecznie umieszcza się go w roztworze utrwalającym po utrwalaniu Paraform Hyde. Jako klasyczny przykład analizy immunohistochemicznej rdzenia kręgowego można zastosować przeciwciało, które rozpoznaje cholinę, acetylotransferazę, w celu identyfikacji neuronów ruchowych w rogu przednim rdzenia kręgowego. Tutaj widzisz dużą liczbę neuronów ruchowych u zdrowego zwierzęcia typu dzikiego.

W przeciwieństwie do tego, transgeniczne zwierzę LS w końcowym stadium wykazuje znacznie mniejszą liczbę neuronów ruchowych w rogu przednim. Oglądając ten artykuł wideo, powinieneś poznać podstawowe badanie kliniczne SODG 93. Mysi model zanikowego stwardnienia bocznego.

Zademonstrowano dwa testy zachowania motorycznego: test wirnika i test wiszącego drutu. Dają one dobrą możliwość oceny podstawowych funkcji motorycznych. Są łatwe do wykonania, czułe w wykrywaniu deficytu motorycznego i efektywne czasowo.

Główna część tego filmu polega na pokazie techniki przygotowania rdzenia kręgowego. Można to oczywiście zastosować do każdego innego modelu choroby myszy i jest to niezbędny krok do późniejszej analizy immunochemicznej patologii choroby w rdzeniu kręgowym. Dziękuję za oglądanie.

Mamy nadzieję, że ten artykuł wideo okaże się pomocny w przyszłych eksperymentach.