Podstawowe metody Caenorhabditis elegans: synchronizacja i obserwacja

W tym filmie pokażemy, jak zsynchronizować elegancję C na pierwszym poziomie. Jest to prosta metoda, ale bardzo powszechna, więc będzie bardzo przydatna. Jesteś jeszcze początkującym.

Jeśli jesteś ekspertem w C, możesz znaleźć tutaj kilka wskazówek, jak zoptymalizować ten protokół. Podstawa synchronizacji robaków opiera się na względnej odporności clen i zarodków na alkaliczny roztwór podchlorynu dorosłych królików. Że te dorosłe robaki z wieloma zarodkami w środku są inkubowane z roztworem podchlorynu, tak aby zostały zabite i pozostały tylko zarodki.

Druga część synchronizacji jest osiągana przez brak pokarmu, tak że mimo że zarodki łapią się w różnym czasie, nie rozwijają się dalej niż jeden L. Pierwszym krokiem do rozpoczęcia protokołu blitzingu jest umieszczenie robaków na etapie leżenia jaj, a następnie kilka jaj rozrzuconych na talerzu. Użyj M nine, aby odzyskać dorosłe osobniki w celu zebrania plonów.

Ponadto zarodki, które już prowadzą powierzchnię płytki, można zeskrobać miękkim materiałem, takim jak kawałek filmu rentgenowskiego, zmyć odzyskane bakterie za pomocą kilku płukań M nine. Zwykle wystarczy para. Po umyciu robaków nadszedł czas, aby dodać świeżo przygotowany roztwór wybielający zgodnie z naszymi preferencjami.

Kontroluj czas inkubacji podczas potrząsania probówką. Możesz monitorować pokolenie dorosłych pod mikroskopem stereoskopowym. Gdy prawie żadne tusze nie są wskazane, zatrzymaj reakcję, dodając M dziewięć, aż probówka będzie całkowicie pełna.

Aby zakończyć protokół, wykonaj co najmniej trzy prania. Z M nine Jaja są inkubowane z ciągłym wahaniem przez noc w buforze M nine, co umożliwia wykluwanie, ale zapobiega dalszemu rozwojowi robaków. Chociaż synchronizację można wykonać w dowolnej temperaturze od 15 do 25 stopni, zalecana jest 15

Ponieważ rozwój jest wolniejszy, Jak wspomnieliśmy podczas jego rozwoju, elegan przechodzi przez cztery stadia larwalne przed osiągnięciem dorosłości, czas, w zależności od temperatury, w której jest hodowany. Podczas gdy typ C, elgan toleruje temperatury wzrostu w zakresie od 15 do 25 stopni. Tempo wzrostu jest jednak wyższe.

Górna temperatura tutaj, można zobaczyć, jak po 24 godzinach etapy, na których znajdują się robaki, są różne. W 15 i 25 stopniach po 48 godzinach w 25 stopniach obserwujemy już zarodki. Musimy jednak poczekać ponad 80 godzin, aby zobaczyć zarodki na powierzchni płytek.

W przypadku robaków rosnących w temperaturze 15 stopni, aby uzyskać optymalne wyniki, podczas przeprowadzania eksperymentu błyskawicznego należy wziąć pod uwagę kilka kwestii. Ważne jest również, aby rozpoznać robaki, które są etapem pożądanym do przeprowadzenia eksperymentu. Pokażemy Ci, jak rozróżnić etapy według rozmiaru, interferencji różnicowej, mikroskopii kontrastowej lub barwienia.

Na tym wykresie możesz docenić tempo wzrostu robaków GaN, w zależności od temperatury, jak mówimy, rosną znacznie szybciej w temperaturze 25 stopni. Istnieje korelacja między wielkością zwierząt a rozwojem elementów morskich. Dzięki odpowiedniemu oprogramowaniu zwierzęta mogą być mierzone, a następnie klasyfikowane do właściwej strefy rozwojowej.

Jednak zgodnie z tym wykresem miejsce jest ogólnym markerem etapów rozwoju. Bardziej uzgodnioną inscenizację można osiągnąć, obserwując części mórz, anatomię, która może być wykorzystana i rozpoznana przez interferencję różnicową, mikroskopię kontrastową lub barwienie DPI. W naszym laboratorium użyliśmy tego protokołu do synchronizacji robaków do różnych eksperymentów jako mikrojaj w barwieniu mono, wizualizacji in situ i barwieniu w górę.

Co więcej, protokół ten pomaga również pozbyć się zanieczyszczeń. W celu zwiększenia kontrastu stosuje się kontrast interferencyjny różnicowy lub mikroskopię nomar. W niebarwionych przezroczystych próbkach zwierzęta są umieszczane żywe na podstawie 2%Agros agros można przygotować wcześniej i przechowywać w temperaturze czterech stopni w razie potrzeby.

Można go stopić i przechowywać w temperaturze 65 stopni. Gdy agros się rozpuści, połóż trochę taśmy na szkiełku i umieść je po obu stronach trzeciego szkiełka. Ostrożnie weź trochę agros i połóż kroplę na zjeżdżalni bez taśmy.

Przykryj agros innym szkiełkiem umieszczonym poprzecznie. Gdy ścieżka jest solidna, oddziel dwa slajdy, ostrożnie przesuwając jeden na drugim. Podkładka przyklei się do jednego z nich.

Dodaj trochę Amazon na podkładce, aby unieruchomić robaki. Zbierz kilka robaków pod mikroskopem preparacyjnym i przenieś je do kropli lele. Unikanie uszkodzenia ścieżki.

Weź szkiełko nakrywkowe i dodaj trochę lakieru do paznokci na krawędziach Ostrożnie umieść szkiełko nakrywkowe na tym szkiełku, zapobiegając tworzeniu się jelit. Preparat można obserwować od razu pod mikroskopem. Jedną z najprostszych cech anatomii Elgana jest Alva.

Na przykład aava w kształcie bożonarodzeniowej trójki jest charakterystyczna dla etapu L czwórka. Szczegółowe informacje na temat anatomii c elgana poprzez rozwój można uzyskać od www.orla.org. Barwienie tapis jest powszechną procedurą identyfikacji pojedynczych komórek.

Mocowanie za pomocą tunelu to szybka metoda naprawy robaków. Aby uzyskać delikatne barwienie, najpierw dodaj kroplę buforu M nine na powierzchnię szkiełka mikroskopowego. Zbierz kilka robaków bezpośrednio z talerza i przenieś je do kropli M dziewięć.

Wyeliminuj nadmiar M nine za pomocą rurki lub miękkiej tkanki. Dodaj tunel do robaków. Zrób to jeszcze raz.

Gdy pierwsza kropla wyschnie, dodaj trochę podłoża montażowego z API i zaśpij przed zabraniem preparatu do mikroskopu. Rozwój go można łatwo zaobserwować w ciepłym stencie z api.