Name: Wyznaczanie przebiegu czasowego klirensu glutaminianu za pomocą analizy dekonwolucyjnej prądów transporterowych astrocytarnych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Poznaj metodę analizy dekonwolucyjnej prądów transporterowych astrocytarnych do wyznaczania przebiegu czasowego klirensu glutaminianu w hipokampusie myszy. Technika ta pozwala badać dynamikę neuroprzekaźnika z wysoką rozdzielczością czasową.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ta praca była wspierana przez National Institute of Neurological Disorders and Stroke Intramural Research Program (NS002986). AS napisał manuskrypt i przeprowadził analizę dekonwolucyjną. JSD opracowało wstępną wersję analizy dekonwolucyjnej i skomentowało tekst.

<ol><li>Ventura, R., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+relationships+between+hippocampal+synapses+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional relationships between hippocampal synapses and astrocytes.</a> J. Neurosci. 19, 6897-6906 (1999).</li>
<li>Witcher, M. R., Kirov, S. A., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+perisynaptic+astroglia+during+synaptogenesis+in+the+mature+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Plasticity of perisynaptic astroglia during synaptogenesis in the mature rat hippocampus.</a> Glia. 55, 13-23 (2007).</li>
<li>Danbolt, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Glutamate uptake.</a> Prog. Neurobiol. 65, 1-105 (2001).</li>
<li>Herman, M. A., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glutamate+concentration+in+hippocampal+slice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Extracellular glutamate concentration in hippocampal slice.</a> J. Neurosci. 27, 9736-9741 (2007).</li>
<li>Arnth-Jensen, N., Jabaudon, D., Scanziani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperation+between+independent+hippocampal+synapses+is+controlled+by+glutamate+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cooperation between independent hippocampal synapses is controlled by glutamate uptake.</a> Nat. Neurosci. 5, 325-331 (2002).</li>
<li>Barbour, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+evaluation+of+synapse+independence%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">An evaluation of synapse independence.</a> J. Neurosci. 21, 7969-7984 (2001).</li>
<li>Rusakov, D. A., Kullmann, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrasynaptic+glutamate+diffusion+in+the+hippocampus%3A+ultrastructural+constraints%2C+uptake%2C+and+receptor+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Extrasynaptic glutamate diffusion in the hippocampus: ultrastructural constraints, uptake, and receptor activation.</a> J. Neurosci. 18, 3158-3170 (1998).</li>
<li>Zerangue, N., Kavanaugh, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flux+coupling+in+a+neuronal+glutamate+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Flux coupling in a neuronal glutamate transporter.</a> Nature. 383, 634-637 (1038).</li>
<li>Eliasof, S., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+glial+cell+glutamate+transporter+is+coupled+to+an+anionic+conductance%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Retinal glial cell glutamate transporter is coupled to an anionic conductance.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 4153-4158 (1996).</li>
<li>Wadiche, J. I., Amara, S. G., Kavanaugh, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+fluxes+associated+with+excitatory+amino+acid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Ion fluxes associated with excitatory amino acid transport.</a> Neuron. 15, 721-728 (1995).</li>
<li>Wadiche, J. I., Kavanaugh, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroscopic+and+microscopic+properties+of+a+cloned+glutamate+transporter%2Fchloride+channel%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Macroscopic and microscopic properties of a cloned glutamate transporter/chloride channel.</a> J. Neurosci. 18, 7650-7661 (1998).</li>
<li>Bergles, D. E., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+activation+of+glutamate+transporters+in+hippocampal+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Synaptic activation of glutamate transporters in hippocampal astrocytes.</a> Neuron. 19, 1297-1308 (1997).</li>
<li>Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+the+glutamate+clearance+time+course+from+transporter+currents+in+CA1+hippocampal+astrocytes%3A+transmitter+uptake+gets+faster+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deriving the glutamate clearance time course from transporter currents in CA1 hippocampal astrocytes: transmitter uptake gets faster during development.</a> J. Neurosci. 25, 2906-2916 (2005).</li>
<li>Scimemi, A., Tian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+transporters+regulate+glutamate+clearance%2C+NMDA+receptor+activation%2C+and+synaptic+plasticity+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal transporters regulate glutamate clearance, NMDA receptor activation, and synaptic plasticity in the hippocampus.</a> J. Neurosci. 29, 14581-14595 (2009).</li>
<li>Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+enhances+glutamate+uptake+via+glutamate+transporters+in+rat+glial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane enhances glutamate uptake via glutamate transporters in rat glial cells.</a> Neuroreport. 12, 1077-1080 (2001).</li>
<li>Barbour, B., Brew, H., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrogenic+uptake+of+glutamate+and+aspartate+into+glial+cells+isolated+from+the+salamander+%28Ambystoma%29+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrogenic uptake of glutamate and aspartate into glial cells isolated from the salamander (Ambystoma) retina.</a> J. Physiol. 436, 169-193 (1991).</li>
<li>Bergles, D. E., Tzingounis, A. V., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+coupled+and+uncoupled+currents+during+glutamate+uptake+by+GLT-1+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Comparison of coupled and uncoupled currents during glutamate uptake by GLT-1 transporters.</a> J. Neurosci. 22, 10153-10162 (2002).</li>
<li>Diamond, J. S., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptically+released+glutamate+does+not+overwhelm+transporters+on+hippocampal+astrocytes+during+high-frequency+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Synaptically released glutamate does not overwhelm transporters on hippocampal astrocytes during high-frequency stimulation.</a> J. Neurophysiol. 83, 2835-2843 (2000).</li>
<li>Benediktsson, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+activity+regulates+glutamate+transporter+dynamics+in+developing+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neuronal activity regulates glutamate transporter dynamics in developing astrocytes.</a> Glia. 60, 175-188 (2012).</li>
<li>Hires, S. A., Zhu, Y., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+measurement+of+synaptic+glutamate+spillover+and+reuptake+by+linker+optimized+glutamate-sensitive+fluorescent+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Optical measurement of synaptic glutamate spillover and reuptake by linker optimized glutamate-sensitive fluorescent reporters.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 4411-4416 (2008).</li>
<li>Scimemi, A., Meabon, J., Woltjer, R. L., Sullivan, J. M., Diamond, J. S., Cook, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid%CE%B21-42+slows+clearance+of+synaptically-released+glutamate+by+mislocalizing+astrocytic+GLT-1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Amyloidβ1-42 slows clearance of synaptically-released glutamate by mislocalizing astrocytic GLT-1.</a> J. Neurosci. 33, 5312-5318 (2013).</li>
</ol>

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

W tym miejscu opisujemy eksperymentalne podejście do uzyskiwania zapisów elektrofizjologicznych z astrocytów, protokół analityczny do izolowania prądów transportera glutaminianu w astrocytach oraz metodę matematyczną do wyznaczania przebiegu czasowego klirensu glutaminianu z prądów transportera astrocytarnego.
Powodzenie analizy zależy od możliwości uzyskania wysokiej jakości nagrań z astrocytów oraz od dokładności algorytmów dopasowania używanych do opisu prądów transporterowych. Analiza deko...

Astrocyty to jeden z najliczniejszych typów komórek w mózgu, o gwiaździstej morfologii i drobnych wypukłościach błony, które rozciągają się przez cały neuropil i docierają do sąsiednich kontaktów synaptycznych 1,2. Błona komórkowa astrocytów jest gęsto upakowana cząsteczkami transportera glutaminianu 3. W warunkach fizjologicznych transportery glutaminianu szybko wiążą glutaminian po zewnątrzkomórkowej stronie błony i przenoszą go do cytoplazmy komórki. W ten sposób transportery utrzymują niskie podstawowe stężenie glutaminianu w przestrzeni zewnątrzkomórkowej 4. Transportery glutaminianu w drobnych procesach astrocytarnych sąsiadujących z synapsami pobudzającymi są idealnie ustawione do wiązania glutaminianu uwalnianego podczas zdarzeń synaptycznych, gdy dyfunduje on ze szczeliny synaptycznej. W ten sposób transportery ograniczają również rozlewanie się glutaminianu w kierunku regionów około- i pozasynaptycznych oraz do sąsiednich synaps, zmniejszając przestrzenne rozprzestrzenianie się sygnałów pobudzających w mózgu 5-7.
Transport glutaminianu to proces elektrogeniczny sprzężony stechiometrycznie z ruchem 3 Na+ i 1 H+ wzdłuż ich gradientu elektrochemicznego oraz z przeciwtransportem 1 K+ 8. Transport glutaminianu jest związany (ale nie jest z nim sprzężony stechiometrycznie) (ale nie jest z nim sprzężony) anionowy przewodność przepuszczalna dla SCN- (tiocyjanianu) > NO3- (azotan) ≈ ClO4- (nadchloran) > I- > Br- > Cl- > F-, nie do CH3 SO3- (sulfonian metanu) i C6H11O7- (glukonian) 9-11. Oba prądy (stechiometryczny i niestechiometryczny) można zarejestrować, uzyskując zapisy całokomórkowe z astrocytów, wizualnie zidentyfikowane w świetle Dodt lub kontraście różnicowym interferencji podczerwieni (IR-DIC) w ostrych wycinkach mózgu 12. Składowa stechiometryczna prądu związanego z transportem glutaminianu przez błonę może być izolowana za pomocą roztworów wewnątrzkomórkowych na bazieCH3, SO, lub C, 6, H, 11,O7 i może być wywoływana przez błyskawiczne uwalnianie glutaminianu na astrocytach 13,14 lub przez aktywację uwalniania glutaminianu z sąsiednich synaps, elektrycznie 12 lub z ukierunkowaną kontrolą optogenetyczną.
Przebieg czasowy stechiometrycznej składowej prądu transportera jest kształtowany przez czas życia profilu stężenia glutaminianu na błonach astrocytarnych (tj. klirens glutaminianu), kinetykę transporterów glutaminianu, pasywne właściwości błony astrocytów, a podczas stymulacji synaptycznej przez synchroniczność uwalniania glutaminianu przez aktywowane synapsy 13. Tutaj opisujemy szczegółowo: (1) eksperymentalne podejście do izolowania stechiometrycznej składowej prądów transportera glutaminianu z zapisów całokomórkowych patch-clamp z astrocytów przy użyciu ostrych mysich wycinków hipokampa jako przykładowego preparatu eksperymentalnego; (2) Analityczne podejście do wyprowadzenia przebiegu czasowego klirensu glutaminianu z tych zapisów 13,14. Metody te mogą być używane do rejestrowania i analizowania prądów transportujących glutaminian z astrocytów w dowolnym regionie ośrodkowego układu nerwowego.

<table><tbody><tr><td>CGP52432</td><td>Tocris</td><td>1246</td><td></td></tr><tr><td>(R,S)-CPP</td><td>Tocris</td><td>173</td><td></td></tr><tr><td>DPCPX</td><td>Tocris</td><td>439</td><td></td></tr><tr><td>LY341495 sól disodowa</td><td>Tocris</td><td>4062</td><td></td></tr><tr><td>MSOP</td><td>Tocris</td><td>803</td><td></td></tr><tr><td>NBQX sól disodowa</td><td>Tocris</td><td>1044</td><td></td></tr><tr><td>D,L-TBOA</td><td>Tocis</td><td>1223</td><td></td></tr><tr><td>Pikrotoksyna</td><td>Sigma</td><td>P1675</td><td></td></tr><tr><td>MNI-L-glutaminian</td><td>Tocris</td><td>1490</td><td></td></tr><tr><td>Alexa 594</td><td>Life Technologies</td><td>A10438</td><td>Opcjonalne</td></tr><tr><td>elektrody matrycowe</td><td>Frederick Haer Company</td><td>MX21AES(JD3)</td><td></td></tr><tr><td>Kapilary ze szkła borokrzemianowego</td><td>World Precision Instruments</td><td>PG10165-4</td><td></td></tr><tr><td>Dwustopniowy szklany ściągacz do mikropipet</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>Loctite 404 klej błyskawiczny</td><td>Ted Pella</td><td>46551</td><td></td></tr><tr><td>Lampa Xe</td><td>Rapp OptoElectronic</td><td>FlashMic</td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro 6</td><td>Wavemetrics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

wyznaczanie przebiegu czasowego klirensu glutaminianu za pomocą analizy dekonwolucyjnej prądów transporterowych astrocytarnych

Deriving the Time Course of Glutamate Clearance with a Deconvolution Analysis of Astrocytic Transporter Currents

Największe zagęszczenie transporterów glutaminianu w mózgu znajduje się w astrocytach. Transportery glutaminianu sprzężają ruch glutaminianu przez błonę z kotransportem 3 Na+ i 1 H+ oraz przeciwtransportem 1 K+. Prąd stechiometryczny generowany w procesie transportu może być monitorowany za pomocą zapisów z astrocytów z całych komórek. Przebieg czasowy rejestrowanego prądu jest kształtowany przez przebieg czasowy profilu stężenia glutaminianu, na który narażone są astrocyty, kinetykę transporterów glutaminianu oraz pasywne właściwości elektrotoniczne błon astrocytowych. W tym miejscu opisujemy metody eksperymentalne i analityczne, które można wykorzystać do rejestrowania prądów transportera glutaminianu w astrocytach i izolowania przebiegu w czasie klirensu glutaminianu od wszystkich innych czynników kształtujących przebieg prądów transportera astrocytarnego. Opisane tutaj metody można wykorzystać do oszacowania czasu życia glutaminianu uwalnianego w mgnieniu oka i uwalnianego synaptycznie na błonach astrocytarnych w dowolnym regionie ośrodkowego układu nerwowego podczas zdrowia i choroby.

Sukces opisanego tutaj podejścia analitycznego zależy w sposób krytyczny od uzyskania wysokiej jakości zapisów elektrofizjologicznych prądów transporterowych z astrocytów w dowolnym regionie ośrodkowego układu nerwowego. W ostrych skrawkach hipokampa myszy astrocyty można łatwo zidentyfikować przy użyciu oświetlenia Dodt lub IR-DIC ze względu na ich małe ciało komórki (Ø = 10 μm) i wyraźne jądro (Rysunek 1). Ich charakterystyczna, gwiaździsta morfologia jest widoczna w mikroskopii epifluorescencyjnej, ko...

Opisujemy metodę analityczną do szacowania czasu życia glutaminianu na błonach astrocytarnych na podstawie elektrofizjologicznych zapisów prądów transportera glutaminianu w astrocytach.

Wyznaczanie przebiegu czasowego klirensu glutaminianu za pomocą analizy dekonwolucyjnej prądów transporterowych astrocytarnych

The highest density of glutamate transporters in the brain is found in astrocytes. Glutamate transporters couple the movement of glutamate across the ...

Ogólnym celem eksperymentu jest oszacowanie przebiegu czasowego usuwania glutaminianu z błon astrocytów po jego uwolnieniu z synaps pobudzających. Pierwszym krokiem w tym procesie jest rejestracja synaptycznie aktywowanego transportu glutaminianu w astrocytach w ostrych skrawkach mózgu w obecności i nieobecności subsaturującej stężenia szerokospektrowego antagonisty transporterów glutaminianu, TBOA. Drugim krokiem jest analiza zapisów w celu wyizolowania prądów synaptycznie aktywowanego transportera glutaminianu z pozostałych komponentów odpowiedzi wywołanej.Następnie szacuje się przebieg czasowy filtracji poprzez analizę prądów transporterowych zarejestrowanych w obecności TBOA, odejmując prądy filtrujące od zjawiska transportu zarejestrowanego w warunkach kontrolnych. W ten sposób uzyskuje się przebieg czasowy usuwania glutaminianu z błon astrocytarnych. Wyniki pokazują, że w hipokampie myszy astrocyty potrzebują zaledwie kilku milisekund, aby usunąć synaptycznie uwolniony glutaminian z przestrzeni zewnątrzkomórkowej.Podejście to stanowi czułe narzędzie do wykrywania zmian w zdolności astrocytów do wychwytu w różnych obszarach mózgu w warunkach fizjologicznych i patologicznych. G

deriving-time-course-glutamate-clearance-with-deconvolution-analysis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neuronauka

Określanie przebiegu czasowego likwidacji glutaminianu za pomocą analizy dekonwolucja prądów transportera astrocytów

Opisano przygotowanie ostrych skrawków mózgu z izolowanych struktur hipokampa oraz jednoczesne rejestracje elektrofizjologiczne astrocytów i neuronów w stratum radiatum podczas stymulacji kolaterali Schaffera. Zaprezentowano farmakologiczną izolację prądów transporterów potasu i glutaminianu w astroglei.

Podwójne rejestracje elektrofizjologiczne odpowiedzi astroglialnych i neuronalnych wywołanych synaptycznie w ostrych skrawkach hipokampa

Ten film demonstruje ocenę uwalniania i usuwania glutaminianu w pojedynczych synapsach korowo-prążkowych w wycinku mózgu myszy. Stymulacja elektryczna ułatwia uwalnianie glutaminianu w synapsie. Uwolniony glutaminian zmienia fluorescencję białka czujnika, która zanika z czasem, wskazując na skuteczność uwalniania i klirensu.

Analiza uwalniania i klirensu glutaminianu w pojedynczej synapsie neuronu w wycinku mózgu myszy

Tutaj opisujemy adaptację protokołów używanych do indukowania plastyczności homeostatycznej w neuronach do badania plastyczności receptorów sprzężonych z białkiem G astrocytów. Metoda ta, ostatnio wykorzystana do badania zmian w mGluR grupy astrocytarnej I u młodych myszy, może być stosowana do pomiaru skalowania różnych astrocytarnych GPCR w tkance dorosłych myszy in situ i in vivo oraz do lepszego zrozumienia wrażliwości receptorów astrocytarnych na zmiany aktywności neuronalnej.

Indukowanie plastyczności receptorów astrocytarnych poprzez manipulację szybkością odpalania neuronów

Tutaj opisujemy konfigurację, nawigację po oprogramowaniu i analizę danych dla przestrzennie i czasowo precyzyjnej metody pomiaru tonicznych i fazowych zmian zewnątrzkomórkowego glutaminianu in vivo za pomocą układów mikroelektrod połączonych enzymami (MEA).

Wykorzystanie bioczujników opartych na enzymach do pomiaru toniku i glutaminianu fazowego w mysich modelach choroby Alzheimera

W tym raporcie przedstawiono dwie metody oparte na biotynylacji, przeznaczone do określania ekspresji na powierzchni komórki i szybkości endocytarnej białek wyrażanych na błonie plazmatycznej.

Określanie ekspresji białek na powierzchni komórki i szybkości endocytów w pierwotnych kulturach astrocytów za pomocą biotynylacji

Tutaj opisujemy metodę mikrodializy in vivo do analizy uwalniania asparaginianu i glutaminianu w brzusznym hipokampie u szczurów z padaczką i bez padaczki, w połączeniu z zapisami EEG. Zewnątrzkomórkowe stężenia asparaginianu i glutaminianu mogą być skorelowane z różnymi fazami choroby.

Mikrodializa aminokwasów pobudzających podczas zapisów EEG u swobodnie poruszających się szczurów

Przedstawiamy protokół do oceny równowagi między uwalnianiem glutaminianu a klirensem w pojedynczych synapsach glutaminergicznym korowo-prążkowych w ostrych wycinkach od dorosłych myszy. Protokół ten wykorzystuje czujnik fluorescencyjny iGluu do wykrywania glutaminianu, kamerę sCMOS do akwizycji sygnału oraz urządzenie do ogniskowego oświetlenia laserowego.

Wskaźniki uwalniania i wychwytu glutaminianu w pojedynczych synapsach w ostrych wycinkach mózgu od myszy normalnych i myszy z chorobą Huntingtona

Tutaj opisujemy metodę obrazowania na żywo in vitro, która umożliwia wizualizację wewnątrzkomórkowego transportu organelli i transportu białek błony komórkowej w mysich astrocytach. W protokole tym przedstawiono również metodologię analizy obrazu w celu wyznaczenia tras transportu i kinetyki transportu ładunków.

Wizualizacja i analiza transportu wewnątrzkomórkowego organelli i innych ładunków w astrocytach

Ten protokół zapewnia zintegrowaną metodę, która obejmuje dostarczenie wirusowe, implantację optrodu, indukcję fototrombotyczną, jednoczesne rejestrowanie aktywności astrocytów i neuronów oraz optogenetyczną stymulację astrocytów. Ta zintegrowana metoda ma na celu zapewnienie jednoczesnego badania relacji astrocyt-neuron na wszystkich etapach przewlekłych udaru niedokrwiennego.

Zintegrowana metoda modelowania udaru fototrombotycego i in vivo rejestracji optrodem aktywności neuronowej i astrocytów u myszy wykonujących zachowania

Niniejszy artykuł szczegółowo opisuje protokół elektroporacji in utero kory mózgowia oraz hipokampa u myszy w stadium E14.5. Wykazujemy również, że jest to cenna metoda badania dendrytów i kolców dendrytycznych w tych dwóch obszarach mózgu.

Wizualizacja i manipulacja genetyczna dendrytów i kolców w korze mózgu i hipokampie myszy z wykorzystaniem elektroporacji in utero

Poznaj metodę analizy dekonwolucyjnej prądów transporterowych astrocytarnych do wyznaczania przebiegu czasowego klirensu glutaminianu w hipokampusie myszy. Technika ta pozwala badać dynamikę neuroprzekaźnika z wysoką rozdzielczością czasową.

Wyznaczanie przebiegu czasowego klirensu glutaminianu za pomocą analizy dekonwolucyjnej prądów transporterowych astrocytarnych

Przeglądaj więcej filmów