Name: Śledzenie skażenia mikrobiologicznego w środowiskach handlu detalicznego za pomocą proszku fluorescencyjnego - przykład środowiska delikatesowego w handlu detalicznym (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Poznaj metodę śledzenia skażenia krzyżowego Listeria monocytogenes w delikatesach detalicznych za pomocą proszku fluorescencyjnego i spektrometrii. Technika ta umożliwia szybką ilościową ocenę zanieczyszczenia mikrobiologicznego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować wszystkim studentom laboratorium bezpieczeństwa żywności i wolontariuszom, którzy pomogli w tym badaniu. Badania te zostały sfinansowane z grantu USDA National Integrated Food Safety Initiative (NIFSI) (Nagroda #10507316).

1. Krzywa wzorcowa
<ol>
	<li>Odważ 37,5 mg proszku fluorescencyjnego i rozpuść w 6 ml etanolu 200 proof. Przygotuj dwukrotne rozcieńczenia seryjne tego roztworu w etanolu 200 proof.</li>
	<li>Wymieszaj wszystkie próbki na wortexie przez 10 sec i zmierz absorbancję przy 370 nm.</li>
	<li>Oblicz ilość proszku fluorescencyjnego na 1 ml etanolu 200 proof.</li>
	<li>Przygotuj krzywą wzorcową (stężenie w mg/ml na osi y oraz absorbancja przy 370 nm na osi x), aby wykazać zależność absorbancji od stężenia proszku fluorescencyjnego.</li>
</ol>
2. Inokulacja wędliny (parówki) proszkiem fluorescencyjnym
<ol>
	<li>Za pomocą czystego noża i deski do krojenia pokrój wędliny na próbki o grubości około 100 mm. Przygotuj trzy próbki oznaczone jako A, B i C.</li>
	<li>Pokryj równomiernie próbkę A proszkiem fluorescencyjnym, używając lekko wilgotnej, czystej gąbki. Równomiernie rozprowadź proszek na próbce mięsa. Nie nakładaj proszku fluorescencyjnego na próbki B i C.</li>
	<li>Zawiń próbki folią spożywczą i oznacz próbkę pokrytą proszkiem fluorescencyjnym jako „A”, a pozostałe dwie próbki jako B i C za pomocą taśmy.</li>
	<li>Umieść próbki w witrynie chłodniczej lub lodówce ustawionej na 4 °C w symulowanej kuchni, w której będzie przeprowadzany eksperyment.</li>
</ol>
3. Przygotowanie symulowanej kuchni delikatesowej
<ol>
	<li>Zapewnij czyste rękawiczki i spray z 70% etanolem w kuchni.</li>
	<li>Zamontuj czarne kompaktowe lampy fluorescencyjne z żarówkami 13 W wokół obszaru krajalnicy.</li>
	<li>Przygotuj wycinek folii aluminiowej o wymiarach 5 cm x 5 cm, który będzie służył jako szablon do wymazów.</li>
	<li>Przygotuj probówki 15 ml zawierające 6 ml 95% etanolu.</li>
</ol>
4. Konfiguracja wideo
Zamontuj trzy kamery w strategicznych miejscach, aby umożliwić jednoczesną obserwację wszystkich obszarów symulowanego deli. Włącz kamery przed rozpoczęciem symulacji procedury krojenia (zgodnie z opisem w Protokole 5) i analizuj wyniki jednocześnie (zgodnie z opisem w Protokole 7).
5. Symulowanie procedur krojenia wędlin w celu monitorowania zanieczyszczeń krzyżowych
W celu zwiększenia liczebności próby i uwzględnienia zmienności, należy przeprowadzić badanie, rekrutując uczestników po zatwierdzeniu protokołu przez Komisję Bioetyczną (IRB) właściwej instytucji. Uczestnikiem może być student, który posiada lub nie posiada doświadczenia w pracy w działach garmaderyjnych. Należy dopilnować, aby każdy uczestnik założył rękawiczki po wejściu do działu garmaderyjnego. Należy wykonać zdjęcie „przed” w świetle fluorescencyjnym UV, a następnie zdjęcie „po” zakończeniu badania. Każdemu uczestnikowi należy przekazać jasne instrukcje pisemne i ustne w następujący sposób:
<ol>
	<li>Podejdź do lodówki.</li>
	<li>Wyjmij mięso oznaczone literą „A”.</li>
	<li>Rozwiń mięso i zachowaj folię spożywczą.</li>
	<li>Umieść mięso na poczwórce krojarki.</li>
	<li>Zabezpiecz mięso uchwytem.</li>
	<li>Włącz zasilanie przełącznikiem.</li>
	<li>Ustaw pokrętło grubości plastrów krojarki na „2”.</li>
	<li>Pokrój i przełóż 5 plastrów mięsa na papier deli.</li>
	<li>Wyłącz zasilanie przełącznikiem i zwolnij uchwyt mięsa.</li>
	<li>Włóż plastry mięsa do plastikowej torebki oznaczonej literą „A”.</li>
	<li>Ponownie zawiń mięso „A” i włóż do lodówki.</li>
	<li>POWTÓRZ kroki 2–11 dla mięs oznaczonych literami „B” i „C”.</li>
</ol>
6. Ilościowe określanie proszku fluorescencyjnego
Kwantyfikuj proszek fluorescencyjny po zakończeniu pozorowanego krojenia (Sekcja 5.4) w kuchni deli. W tym celu wykonaj następujące czynności:
<ol>
	<li>Użyć sterylnego szablonu z folii aluminiowej o wymiarach 5 cm x 5 cm i umieścić go na obszarach zaznaczonych na Rysunku 1.</li>
	<li>Używając sterylnego patyczka z alginianu wapnia nasączonego 95% ethanolem, przemyć dany obszar, a następnie umieścić patyczek w 6 ml 95% ethanolu w sterylnej probówce z polipropylenu.</li>
	<li>Dokładnie wymieszać zawartość probówki na wirówce typu vortex i przenieść do kuwety szklanej w celu pomiaru absorbancji przy 370 nm.</li>
	<li>Na podstawie krzywej wzorcowej określić ilość proszku fluorescencyjnego (y), korzystając z następującego równania: y = mx + b , gdzie x to absorbancja, m to nachylenie krzywej wzorcowej, a b to punkt przecięcia z osią.</li>
	<li>W celu normalizacji danych obliczyć procent proszku fluorescencyjnego na pobrany obszar, korzystając z poniższego wzoru:</li>
</ol>
<img src="/files/ftp_upload/51402/51402eq1.jpg" alt="Wzór na stężenie proszku fluorescencyjnego, metoda obliczania stosunku." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Wzór 1">
7. Analiza wideo
Nagraj uczestników podczas wykonywania zadań 5.1-5.12. Zsynchronizuj i zapisz nagrania wideo na płytach DVD, aby umożliwić jednoczesny podgląd wszystkich kątów widzenia. Obejrzyj nagrania, aby zarejestrować liczbę dotknięć dłonią (liczbę razy, w których ochotnicy dotykają obszarów w symulowanym sklepie deli) na różnych powierzchniach w środowisku sklepu (kompletny zestaw danych zostanie niezależnie przeanalizowany przez 4 różnych badaczy).

<ol><li>Sheen, S., Hwang, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+the+cross-contamination+of+Escherichia+coli+O157%3A+H7+on+the+surface+of+ready-to-eat+meat+product+while+slicing%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling the cross-contamination of Escherichia coli O157: H7 on the surface of ready-to-eat meat product while slicing.</a> Food Microbiol. 27, 37-43 (2010).</li>
<li>Crandall, P., Neal, J. Jr, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimizing+the+risk+of+Listeria+monocytogenes+in+retail+delis+by+developing+employee+focused%2C+cost+effective+training%5BTitle%5D)+AND+%22Agric.+Food+Anal.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Minimizing the risk of Listeria monocytogenes in retail delis by developing employee focused, cost effective training.</a> Agric. Food Anal. Bacteriol. 1, 159-174 (2011).</li>
<li>Koo, O. K., Sirsat, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+control+of+Salmonella+in+ready-to-eat+products%5BTitle%5D)+AND+%22Agric.+Food+Anal.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical control of Salmonella in ready-to-eat products.</a> Agric. Food Anal. Bacteriol. 2, 56-68 (2012).</li>
<li>Hanning, I. B., Johnson, M. G., Ricke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precut+prepackaged+lettuce%3A+a+risk+for+listeriosis%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Precut prepackaged lettuce: a risk for listeriosis?</a> Foodborne Pathog. Dis. 5, 731-746 (2008).</li>
<li>Hanning, I. B., Nutt, J. D., Ricke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonellosis+outbreaks+in+the+United+States+due+to+fresh+produce%3A+sources+and+potential+intervention+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Salmonellosis outbreaks in the United States due to fresh produce: sources and potential intervention measures.</a> Foodborne Pathog. Dis. 6, 635-648 (2008).</li>
<li>Zhu, M., Du, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Listeria+monocytogenes+contamination+in+ready%E2%80%90to%E2%80%90eat+meat+products%5BTitle%5D)+AND+%22Compr.+Rev.+Food+Sci.+Food+Safety%22%5BJournal%5D)">Control of Listeria monocytogenes contamination in ready‐to‐eat meat products.</a> Compr. Rev. Food Sci. Food Safety. 4, 34-42 (2005).</li>
<li>Lianou, A., Sofos, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+incidence+and+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+ready-to-eat+products+in+retail+and+food+service+environments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">A review of the incidence and transmission of Listeria monocytogenes in ready-to-eat products in retail and food service environments.</a> J. Food Protect. 70, 2172-2198 (2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+risk+assessment+of+relative+risk+to+public+health+from+foodborne+Listeria+monocytogenes+among+selected+categories+of+ready-to-eat+foods%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Quantitative risk assessment of relative risk to public health from foodborne Listeria monocytogenes among selected categories of ready-to-eat foods.</a> , http://www.fda.gov/downloads(2003 Forthcoming.</li>
<li>Endrikat, S., Gallagher, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+risk+assessment+for+Listeria+monocytogenes+in+prepackaged+versus+retail-sliced+deli+meat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">A comparative risk assessment for Listeria monocytogenes in prepackaged versus retail-sliced deli meat.</a> J. Food Protect. 73, 612-619 (2010).</li>
<li>Pradhan, A. K., Ivanek, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+public+health+impact+of+Listeria+monocytogenes+product-to-product+and+environment-to-product+contamination+of+deli+meats+at+retail%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Comparison of public health impact of Listeria monocytogenes product-to-product and environment-to-product contamination of deli meats at retail.</a> J. Food Protect. 74, 1860-1868 (2011).</li>
<li>Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Handwashing+Technique+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Patent+number+5900067%22%5BJournal%5D)">Handwashing Technique Analysis.</a> Patent number 5900067. , (1999).</li>
<li>Gibson, K. E., Koo, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+and+relative+quantification+of+cross-contamination+within+a+mock+retail+delicatessen+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Observation and relative quantification of cross-contamination within a mock retail delicatessen environment.</a> Food Control. 31, 116-124 (2013).</li>
<li>Xiao, M., Zheng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+and+System+for+Fecal+Detection%5BTitle%5D)+AND+%22Patent+number+5821546%22%5BJournal%5D)">Method and System for Fecal Detection.</a> Patent number 5821546. , (1998).</li>
<li>Waldroup, A., Kirby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+and+System+for+Fecal+Detection%5BTitle%5D)+AND+%22Patent+number+5621215%22%5BJournal%5D)">Method and System for Fecal Detection.</a> Patent number 5621215. , (1997).</li>
<li>Ashby, K. D., Wen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+of+dietary+porphyrins+as+a+basis+for+real-time+detection+of+fecal+contamination+on+meat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Agric.+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Fluorescence of dietary porphyrins as a basis for real-time detection of fecal contamination on meat.</a> J. Agric. Food Chem. 51, 3502-3507 (2003).</li>
<li>Cabrera-Diaz, E., Moseley, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+protein+marked+Escherichia+coli+biotype+I+strains+as+surrogates+for+enteric+pathogens+in+validation+of+beef+carcass+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Fluorescent protein marked Escherichia coli biotype I strains as surrogates for enteric pathogens in validation of beef carcass interventions.</a> J. Food Protect. 72, 295-303 (2009).</li>
<li>Byrd, J., Hargis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+marker+for+the+detection+of+crop+and+upper+gastrointestinal+leakage+in+poultry+processing+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Poult.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fluorescent marker for the detection of crop and upper gastrointestinal leakage in poultry processing plants.</a> Poult. Sci. 81, 70-74 (2002).</li>
<li>Vorst, K. L., Todd, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+Listeria+monocytogenes+during+mechanical+slicing+of+turkey+breast+bologna%2C+and+salami.%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Transfer of Listeria monocytogenes during mechanical slicing of turkey breast bologna, and salami.</a> J. Food Protect. 69, 619-626 (2006).</li>
</ol>

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Ogólnym celem tego badania było wykazanie, w jaki sposób może dojść do bakteryjnego zanieczyszczenia krzyżowego w środowisku detalicznym delikatesów, aby opracować strategie kontroli i zmniejszenia ryzyka chorób przenoszonych drogą pokarmową. Środowisko delikatesów detalicznych jest szczególnie narażone na zanieczyszczenie L. monocytogenes . USDA-FSIS poinformował, że mięso delikatesowe krojone w sklepie detalicznym ma siedmiokrotnie większy związek z listeriozą niż mięso delikatesowe krojone i pakowanew za...

Zanieczyszczenie krzyżowe patogenów przenoszonych przez żywność w środowisku przygotowywania żywności, szczególnie w sekcji detalicznej, jest głównym problemem ze względu na zwiększone ryzyko chorób przenoszonych drogą pokarmową z różnych źródeł, w tym mięsa i warzyw1-5. Najczęściej patogeny bakteryjne przedostają się do środowiska handlu detalicznego poprzez skażone produkty spożywcze6. Żywność gotowa do spożycia przygotowana na poziomie detalicznym budzi szczególne obawy, ponieważ zwykle nie ma dalszej interwencji ani obróbki (tj. gotowania lub podgrzewania) przed spożyciem7. Co więcej, patogeny obecne w zanieczyszczonej żywności RTE mogą być następnie przenoszone na inne produkty spożywcze lub powierzchnie mające kontakt z żywnością w środowisku detalicznym.
Chociaż zanieczyszczenie krzyżowe może wystąpić w praktycznie każdym środowisku handlu detalicznego żywnością, delikatesy są szczególnie interesujące szczególnie ze względu na powiązanie wędlin RTE z patogenem Listeria monocytogenes2. Na podstawie analizy oceny ryzyka przeprowadzonej przez amerykańską Agencję ds. Żywności i Leków (FDA) oraz Służbę Bezpieczeństwa i Kontroli Żywności Departamentu Rolnictwa Stanów Zjednoczonych (USDA-FSIS), skażone wędliny są prawdopodobnie odpowiedzialne za 90% przypadków listeriozy - rzadkiej, ale ciężkiej choroby człowieka wywoływanej przez L. monocytogenes - w Stanach Zjednoczonych8. Ogólnie rzecz biorąc, wędliny krojone w zakładach handlu detalicznego i gastronomii wiązały się z wyższym ryzykiem wystąpienia L. monocytogenes w porównaniu z wędlinami w krojonych mięsach w zakładzie kontrolowanym przez USDAprzez producenta 9. Może to wynikać ze zwiększonego prawdopodobieństwa wprowadzenia patogenów przez osoby mające kontakt z żywnością, przychodzące surowce lub przetworzoną żywność, która może zostać skażona po obróbce7. Ogólnie rzecz biorąc, listerioza odpowiada za około 28% szacowanych zgonów spowodowanych chorobami przenoszonymi drogą pokarmową rocznie w USA.
Ze względu na zwiększone ryzyko zanieczyszczenia L. monocytogenes w wędlinach krojonych na poziomie detalicznym, sama krajalnica delikatesowa została uznana za ważny czynnik powierzchniowego przenoszenia patogenów przenoszonych przez żywność w środowisku detalicznym2,10. Jak wskazuje Sheen1, krojenie jest ostatnim etapem przetwarzania przed spożyciem; Dlatego krajalnica delikatesowa powinna być uważana za krytyczny punkt kontrolny zarówno dla zrozumienia, jak i zapobiegania zanieczyszczeniu krzyżowemu1.
Ogólnym celem tego badania było opracowanie metodologii śledzenia zanieczyszczeń w środowisku delikatesów detalicznych za pomocą proszku fluorescencyjnego, takiego jak Glo Germ. Jest to związek fluorescencyjny, który został wykorzystany do symulacji bakteryjnego zanieczyszczenia krzyżowego i praktyk sanitarnych11,12. Badanie to miało na celu śledzenie przenoszenia patogenów z zanieczyszczonego mięsa do krajalnicy, otaczającego środowiska i innych wędlin. Zrozumienie ścieżek skażenia ma kluczowe znaczenie dla opracowania zarówno skutecznych interwencji, jak i materiałów edukacyjnych dla pracowników i menedżerów handlu detalicznego. Podobne podejście można zastosować do symulacji przenoszenia patogenów w innych środowiskach przetwórczych (np. drób i wołowina), gospodarstwach rolnych i szpitalach.

<table><tbody><tr><td>Glo Germ Powder</td><td>Glo Germ Co</td><td></td><td>Zakupiony od sprzedawcy</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Markery permanentne</td><td>Sharpie</td><td></td><td>Zakupiony w sklepie stacjonarnym</td></tr><tr><td>Rękawice</td><td>VWR</td><td>82026-424</td><td></td></tr><tr><td>Deli Meat</td><td>NA</td><td></td><td>NA Bologna Kleń ze zwykłego sklepu spożywczego</td></tr><tr><td>Deska do krojenia</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Deska do krojenia regukar kuchenna</td></tr><tr><td>Nóż</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Zwykły nóż kuchenny&nbsp;</td></tr><tr><td>Szablony sterylne 5 cm x 5 cm</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Szablony z folii aluminiowej pocięte na szablony 5 cm x 5 cm i wysterylizowane&nbsp;</td></tr><tr><td>15 ml Polipropylenowe probówki wirówkowe</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>Waciki bawełniane</td><td>Puritan</td><td>25-806</td><td></td></tr><tr><td>Kuwety szklane</td><td>VWR</td><td>470019-186</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>58816-121</td><td></td></tr><tr><td>Kamera z klapką</td><td>Flip Ultra HD</td><td>NA</td><td>Zakupiona online</td></tr><tr><td>Krajalnica delikatesowa</td><td>Bizerba</td><td>SE-12</td><td></td></tr><tr><td>Lodówka delikatesowa</td><td>True Company</td><td>TDBD-722</td><td></td></tr><tr><td>Skala</td><td></td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometr</td><td>Milton Roy Company</td><td>NA</td><td>Spectronic 20D</td></tr></tbody></table>

Śledzenie skażenia mikrobiologicznego w środowiskach handlu detalicznego za pomocą proszku fluorescencyjnego - przykład środowiska delikatesowego w handlu detalicznym

Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example

Zanieczyszczenie krzyżowe patogenów przenoszonych przez żywność w środowisku detalicznym jest poważnym problemem zdrowia publicznego, przyczyniającym się do zwiększonego ryzyka chorób przenoszonych drogą pokarmową. Przetworzona żywność gotowa do spożycia (RTE), taka jak wędliny, sery, a w niektórych przypadkach świeże produkty, brała udział w epidemiach chorób przenoszonych przez żywność z powodu zanieczyszczenia patogenami, takimi jak Listeria monocytogenes. W odniesieniu do L. monocytogenes, krajalnice delikatesowe są często głównym źródłem zanieczyszczenia krzyżowego. Celem tego badania było wykorzystanie związku fluorescencyjnego do symulacji zanieczyszczenia bakteryjnego i śledzenia tego zanieczyszczenia w środowisku detalicznym. Symulacja kuchni delikatesowej została zaprojektowana tak, aby symulować środowisko handlu detalicznego. Mięso delikatesowe zostało zaszczepione związkiem fluorescencyjnym, a ochotnicy zostali zrekrutowani do wykonania zestawu zadań podobnych do tych, których oczekuje się od pracownika handlu detalicznego żywnością. Ochotnicy zostali poinstruowani, aby kroić, pakować i przechowywać mięso w lodówce delikatesowej. Potencjalne zanieczyszczenie krzyżowe śledzono w symulowanym środowisku detalicznym poprzez pobranie wymazu z określonych obszarów i zmierzenie gęstości optycznej pobranego obszaru za pomocą spektrofotometru. Wyniki wykazały, że uchwyt lodówki (tj. skrzynki na delikatesy) i różne obszary krajalnicy miały największe ryzyko zanieczyszczenia krzyżowego. Wyniki tego badania mogą zostać wykorzystane do opracowania bardziej ukierunkowanych materiałów szkoleniowych dla pracowników handlu detalicznego. Ponadto podobne metodologie można również wykorzystać do śledzenia skażenia mikrobiologicznego w środowiskach produkcji żywności (np. małych gospodarstwach rolnych), szpitalach, domach opieki, statkach wycieczkowych i hotelach.

Rysunek 1 przedstawia obszary krojarki, które zostały przetarte wymazami po wykonaniu przez ochotników przypisanych zadań. Ochotnicy zostali nagrani, aby przeanalizować średnią częstotliwość kontaktu dłoni z tymi różnymi powierzchniami. Częstotliwość kontaktu dłoni została przeanalizowana przez czterech różnych obserwatorów i uśredniona. Wyniki te przedstawiono na Rysunku 2. Dane wskazują, że uchwyt do mięsa, opakowanie wędlin, wędliny oraz papier do wędlin charakteryzowały się najwyższy...

Ogólnym celem tego badania było pokazanie potencjalnego mechanizmu zanieczyszczenia krzyżowego patogenu Listeria monocytogenes przenoszonego przez żywność w sklepie delikatesowym. Metodologia ta może być stosowana w wielu różnych środowiskach do śledzenia zanieczyszczenia patogenami.

Cross contamination of foodborne pathogens in the retail environment is a significant public health issue contributing to an increased risk for foodborne ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest zademonstrowanie potencjalnego mechanizmu kontaminacji krzyżowej patogenem przenoszonym przez żywność, *Listeria monocytogenes*, w warunkach sklepu z produktami deli. Cel ten zostaje osiągnięty poprzez wcześniejsze zaprojektowanie modelowej kuchni deli w celu symulacji środowiska handlowego.W drugim kroku wędliny są inokulowane związkiem fluorescencyjnym, a następnie wolontariusze są proszeni o pokrojenie, zapakowanie i przechowywanie pokrytego produktu w lodówce. W ostatnim kroku potencjalne zanieczyszczenie krzyżowe zostanie prześledzone poprzez obserwację związku fluorescencyjnego w świetle UV. Ostatecznie można zastosować spektrometrię w celu ilościowego oznaczenia związku fluorescencyjnego, co zilustruje, w jaki sposób dochodzi do zanieczyszczenia krzyżowego w środowisku sprzedaży detalicznej wędlin.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z metodami wykorzystującymi mikroorganizmy jest możliwość szybkiego ilościowego oznaczenia związku fluorescencyjnego za pomocą spektrofotometrii. Choć metoda ta może dostarczyć informacji na temat handlu detalicznego, w zakresie bezpieczeństwa żywności może być ona stosowana również w innych systemach, takich jak małe gospodarstwa rolne, zakłady przetwórstwa spożywczego i inne punkty gastronomiczne. Rozpocznij od przygotowania na blacie czystych rękawiczek oraz 70% etanolu do wykorzystania podczas procedury.Następnie za pomocą czystego noża i deski do krojenia pokrój wędlinę na trzy próbki o grubości około 100 milimetrów. Potem za pomocą lekko wilgotnej, czystej gąbki równomiernie pokryj jedną próbkę świeżo przygotowanym proszkiem fluorescencyjnym. Następnie owiń wszystkie próbki folią spożywczą i za pomocą taśmy oznacz próbkę pokrytą proszkiem fluorescencyjnym jako a, a pozostałe dwie próbki jako b i c.Następnie umieść próbki w temperaturze czterech stopni Celsius i zamontuj wokół obszaru krojarki czarne kompaktowe lampy fluorescencyjne z żarówkami o mocy 13 watt. Wytnij fragment folii aluminiowej o wymiarach pięć na pięć centymetrów, który będzie służył jako szablon do wymazów, a w tym samym czasie napełnij probówki o pojemności 1315 mililitrów sześcioma mililitrami 95% ethanol. Następnie zamontuj trzy kamery wideo w strategicznych miejscach, aby jednocześnie obserwować wszystkie obszary symulowanego sklepu z wędlinami.Aby śledzić zanieczyszczenie wędlin proszkiem fluorescencyjnym, włącz kamery, aby nagrać uczestników podczas procedury, i zrób zdjęcie symulowanego stoiska wędliniarskiego przed rozpoczęciem badania, używając czarnego światła fluorescencyjnego. Następnie poproś każdego uczestnika o wykonanie następujących czynności. Po pierwsze, wyjmij z lodówki próbkę mięsa oznaczoną literą A.Następnie rozwiń mięso, zachowując folię spożywczą, i umieść próbkę na tacy transportowej krojarki. Zabezpiecz próbkę uchwytem do mięsa, a następnie włącz krojarkę i ustaw pokrętło indeksu krojarki na wartość dwa. Następnie pokrój i wyłóż pięć plastrów mięsa na papier do wędlin, po czym wyłącz zasilanie i zwolnij uchwyt do mięsa.Umieść plastry mięsa w plastikowej torebce oznaczonej jako A, a następnie ponownie zapakuj próbkę mięsa i przenieś ją do lodówki po pobraniu próbek B i C w sposób zaprezentowany powyżej, po wykonaniu zdjęcia pozorowanej kuchni. Aby ilościowo określić stopień zanieczyszczenia proszkiem fluorescencyjnym, połóż sterylny szablon z folii aluminiowej na każdym obszarze wskazanym na obrazie. Następnie przemyj każdy obszar sterylnym tamponem bawełnianym z alginianu wapnia, namoczonym w 95%Ethanol, i umieść jeden tampon w każdej z probówek zawierających 95%Ethanol.Każdą probówkę dokładnie wymieszaj na wstrząsarce wirowej (vortexie), a następnie przelej zawartość do oddzielnych kuwet szklanych. Zmierz absorbancję każdej próbki z wymaza przy 370 nanometrach, a następnie zastosuj wzór, aby obliczyć ilość proszku fluorescencyjnego zebranego wymazem z każdego obszaru. Na koniec obejrzyj wideo, aby określić liczbę dotknięć poszczególnych powierzchni pozorowanego urządzenia.W tym reprezentatywnym eksperymencie nagrano ochotników, aby przeanalizować średnią częstotliwość kontaktu dłoni z różnymi powierzchniami krojaka do wędlin podczas przygotowywania plasterków wędlin. Następnie różni obserwatorzy przeanalizowali nagranie, a częstotliwość kontaktów dłoni została uśredniona. Dane wskazują, że zgodnie z oczekiwaniami, uchwyt do wędlin, owijarka, wędlina oraz papier do wędlin wykazały najwyższe wskaźniki kontaktu dłoni, ze średnią od 8 do 14 kontaktów na uczestnika.Następnie pobrano wymazy z powierzchni takich jak lodówka, stół chwytny, chwytak do mięsa, ostrze krojarki oraz poszczególne elementy tacki wózka, a następnie ilościowo określono zawartość proszku fluorescencyjnego na różnych komponentach krojarki i w symulowanej kuchni. Jak oczekiwano, wyniki wykazały, że najwyższy poziom zanieczyszczenia stwierdzono na lodówce, chwycie, chwytaku do mięsa oraz płytach tylnych.Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby pamiętać o jednoczesnym włączeniu kamer wideo, co zapewni synchronizację obrazów. Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania z zakresu bezpieczeństwa żywności, takie jak mechanizm powstawania kontaminacji krzyżowej, a na podstawie uzyskanych wyników można opracować skuteczne praktyki szkoleniowe.

tracking-microbial-contamination-retail-environments-using

Research

JoVE Journal

Environment

Środowisko

Śledzenie skażenia mikrobiologicznego w środowiskach detalicznych przy użyciu fluorescencyjnego proszku - przykład środowiska drogerii delikatesowej

Niniejszy protokół opisuje prostą metodę opartą na zastosowaniu taśmy klejącej do pobierania próbek z powierzchni pomidorów oraz innych świeżych produktów rolnych, a następnie szybką detekcję całych komórek Salmonella przy użyciu fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (FISH).

Połączenie pobierania próbek za pomocą taśmy klejącej i fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ w celu szybkiego wykrywania Salmonella na świeżych produktach rolnych

Niedawno opisaliśmy nowatorskie podejście do generowania fluorogennych sond DNAzymowych, które mogą być wykorzystane do stworzenia prostego, fluorescencyjnego testu typu „wymieszaj i odczytaj” do wykrywania bakterii. Te specjalne sondy DNA katalizują rozszczepienie zmodyfikowanego chromoforem substratu chimerycznego DNA-RNA w obecności surowej mieszaniny zewnątrzkomórkowej (CEM) produkowanej przez konkretną bakterię, przekładając tym samym detekcję bakterii na generowanie sygnału...

Wykrywanie bakterii przy użyciu fluorogennych DNAzymów

Ten film demonstruje test do pomiaru akumulacji fluorescencyjnego czujnika antybiotykowego w komórkach bakteryjnych. Narażenie na inhibitor pompy wypływowej zaburza transbłonowy gradient protonów w komórkach bakteryjnych, do których dodaje się antybiotyk sprzężony z fluoroforem. Hamowanie pomp wypływowych z powodu zaburzonego gradientu protonów powoduje akumulację antybiotyku wewnątrz bakterii. Komórki bakteryjne są poddawane lizie, a intensywność fluorescencji jest mierzona w celu...

Test do pomiaru akumulacji fluorescencyjnej sondy antybiotykowej w komórkach bakteryjnych

Protokół obejmujący zintegrowane zagęszczenie, wzbogacenie i kolorymetryczne wykrywanie patogenów przenoszonych przez żywność w dużych ilościach wody rolniczej jest tutaj przedstawiony.  Woda jest filtrowana przez zmodyfikowane waciki Moore'a (MMS), wzbogacone o selektywne lub nieselektywne media, a detekcja odbywa się za pomocą papierowych urządzeń analitycznych (μPAD) osadzonych w bakteryjno-orientacyjnych podłożach kolorymetrycznych.

Kolorymetryczne wykrywanie Escherichia coli, Salmonella spp. i Listeria monocytogenes na papierze w dużych ilościach wody rolniczej

Protokół oparty na PCR został dostosowany do wykrywania Cronobacter spp., Salmonella enterica i Listeria monocytogenes z powierzchni ciała i kanałów pokarmowych pojedynczych dziko żyjących much. Celem tego protokołu jest wykrycie i wyizolowanie patogenów bakteryjnych od poszczególnych owadów zebranych w ramach programu pobierania próbek środowiskowych podczas badań epidemii przenoszonych przez żywność.

Wykrywanie patogenów bakteryjnych przenoszonych przez żywność przez pojedyncze muchy brudne

Rola asortymentu (segregacji przestrzennej) w scenariuszach ewolucyjnych może być badana za pomocą prostych systemów mikrobiologicznych w laboratorium, które pozwalają na kontrolowane dostosowanie rozkładu przestrzennego. Modyfikując gęstość komórek założycielskich, można wizualizować różne poziomy asortymentu przy użyciu znakowanych fluorescencyjnie szczepów bakteryjnych w biofilmach kolonii Bacillus subtilis.

Monitorowanie segregacji przestrzennej w kolonizujących powierzchniowo populacjach drobnoustrojów

Ogólnym celem tego protokołu jest synteza funkcjonalnych nanosensorów do przenośnego, opłacalnego i szybkiego wykrywania specyficznie ukierunkowanych bakterii chorobotwórczych poprzez połączenie relaksacji magnetycznej i emisji fluorescencji.

Badania przesiewowe patogenów przenoszonych przez żywność przy użyciu nanoczujnika magnetofluorescencyjnego: szybkie wykrywanie E. coli O157:H7

Prezentowany tutaj jest protokół dla techniki opartej na mikroskopii epifluorescencyjnej dla pojedynczej komórki, do ilościowego określania wskaźników wypasu u wodnych drapieżnych eukariontów z wysoką precyzją i rozdzielczością taksonomiczną.

Fluorescencyjnie znakowane bakterie jako znacznik w celu ujawnienia nowych szlaków przepływu węgla organicznego w ekosystemach wodnych

Celem tego protokołu jest wykrycie różnych toksnotypów Clostridium perfringens w lokalnie zakupionej żywności, szczególnie w przypadku szczepów B i D wytwarzających toksynę epsilon, bez użycia komór beztlenowych.

Wzbogacanie i wykrywanie toksyn Clostridium perfringens w detalicznych próbkach żywności

Fluorescencyjnie oznaczone antybiotyki są potężnymi narzędziami, które mogą być używane do badania wielu aspektów oporności na środki przeciwdrobnoustrojowe. W artykule opisano przygotowanie antybiotyków znakowanych fluorescencyjnie i ich zastosowanie do badania antybiotykooporności bakterii. Sondy mogą być wykorzystywane do badania mechanizmów oporności bakterii (np. wypływu) za pomocą spektrofotometrii, cytometrii przepływowej i mikroskopii.

Wizualizacja oporności bakterii za pomocą fluorescencyjnych sond antybiotykowych

Protokół podsumowuje najlepsze praktyki mające na celu zminimalizowanie obciążenia biologicznego mikroorganizmów w środowisku pomieszczeń czystych i zawiera strategie, takie jak monitorowanie środowiska, monitorowanie procesów i testowanie sterylności produktu. Jest to istotne dla zakładów produkcyjnych i badawczych, które są zobowiązane do spełniania aktualnych standardów dobrej praktyki tkankowej i aktualnych standardów dobrej praktyki wytwarzania.

Strategie kontroli i monitorowania mikrobiologicznego w pomieszczeniach czystych i terapiach komórkowych

Poznaj metodę śledzenia skażenia krzyżowego Listeria monocytogenes w delikatesach detalicznych za pomocą proszku fluorescencyjnego i spektrometrii. Technika ta umożliwia szybką ilościową ocenę zanieczyszczenia mikrobiologicznego.

Śledzenie skażenia mikrobiologicznego w środowiskach handlu detalicznego za pomocą proszku fluorescencyjnego - przykład środowiska delikatesowego w handlu detalicznym (Wideo) | JoVE Journal

Śledzenie skażenia mikrobiologicznego w środowiskach handlu detalicznego za pomocą proszku fluorescencyjnego - przykład środowiska delikatesowego w handlu detalicznym

Przeglądaj więcej filmów